研究課題
本研究では、新規メチル化修飾酵素CAPAMによる、ヒトを含む脊椎動物に特異的に見出されるmRNAの5'末端に起こる化学修飾N6-メチルアデノシン(始端m6A)の機能解明を目指した。これまでに明らかにされた始端m6Aを持つmRNAのm6A構造の有無によりタンパク質合成の動態が変化する機構を解明するため、始端m6Aの有無が異なるモデルRNAを試験管内転写で合成し、共同研究により培養細胞ライセートと混合させたRNA沈降成分に存在するタンパク質を質量分析で網羅的に定量することで、始端m6A依存的な結合因子を探索した。結果、始端m6A依存的に結合する因子と結合しなくなる因子がそれぞれ複数見いだされた。また始端m6Aは核内で導入されることから、核内タンパク質との結合が始端m6A機能と関係することが想定されるため、核フラクション中の始端m6A結合因子の探索も検討している。マテリアルの準備や分画操作の検討は容易でない一面があるものの、見いだされた各因子のリコンビナントタンパク質を作成し、モデルRNAとの結合性が実際に見られるか検証している。一方、m6A脱メチル化酵素活性を持つFTOがsnRNAの始端m6Aを除去する現象が当該年度に報告された。snRNAの始端m6AにCAPAMが関与するか、またそれがCAPAMの機能と関係するか不明であり、FTO欠損細胞株を作成し、検証を進めている。
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