| 研究課題/領域番号 |
18K19268
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
服部 雅一 京都大学, 医学研究科, 特定教授 (40211479)
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| 研究分担者 |
福島 祐二 京都大学, 医学研究科, 特定助教 (90583146)
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| 研究期間 (年度) |
2018-06-29 – 2020-03-31
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| キーワード | 免疫老化 / 老化関連T細胞 / CD153リバースシグナル |
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| 研究実績の概要 |
1．マウスCD153細胞外ドメイン発現プラスミドの構築
予備実験の際に用いたマウスCD153発現プラスミドはマウスCD153分子全体を発現させるものであったせいか、発現量が低い傾向にあった。またタグを付加していないためin vivoにおいて産生されるCD153のトレースが困難であったことから、タグを付加したマウスCD153細胞外ドメインを発現するプラスミドを構築し直した。構築に当たりin vivoでの発現効率を上げるため、ニワトリアクチン発現プロモーターを持つCAGプラスミドを採用した。構築したプラスミドを293T細胞に導入したところ非常に高い発現が確認できた。このプラスミドはCD153細胞外ドメイン分子を精製するためのHisタグを有している。
2．CD153リバースシグナルの実態解明
メモリーT細胞の分化・生存においてCD153リバースシグナルの関与が示唆されていたが、シグナルの実態については不明であった。そこでこのシグナルを解析するため、2種類のマウスT細胞株（EL-4、3A9）にCD153を強制発現し、その影響を解析した。その結果、CD153強制発現によりT細胞抗原レセプター（TCR）からのシグナルが非常に強く抑制されること、CD153抗体およびCD30遺伝子破壊細胞株を用いた実験からこの抑制がCD30との相互作用に依存していることが明らかになった。CD153はタイプII分子であり細胞内ドメインをほとんど有さないこと、さらにその細胞内ドメインを欠損させたΔC-CD153の強制発現でも同様の阻害効果が認められたことから、細胞外においてCD153と会合する何らかの分子がTCRシグナルの抑制に関与していると推測される。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
投与に用いるプラスミドにいくつか問題が見つかったため、新たに発現プラスミドを構築していたためマウスCD153発現プラスミド投与実験において大幅な遅れが生じた。しかし問題のあったプラスミドの再構築が完了していることから、今年度中には実験計画をほぼ遂行できる予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
再構築が終了した新規マウスCD153発現プラスミドを用いて投与実験を開始する予定である。一方、当初の実験計画には予定されていなかったメモリーT細胞の生体内分化・生存に関与すると考えられるCD153リバースシグナルの実態解明についてはかなり解析が進んでおり、現在その解析のキーを握るCD153会合分子の同定を行っている。CD153リバースシグナル評価系の確立もできたので、これを用いてCD153リバースシグナル阻害活性を持つ新規定分子化合物のスクリーニングを行う予定である。
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