| 研究課題/領域番号 |
18K19315
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| 研究機関 | 国立医薬品食品衛生研究所 |
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研究代表者 |
小野 竜一 国立医薬品食品衛生研究所, 毒性部, 室長 (10401358)
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| 研究期間 (年度) |
2018-06-29 – 2021-03-31
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| キーワード | エクソソーム |
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| 研究実績の概要 |
本研究課題の目的は、エクソソーム表面に存在するタンパクに時期・部位特異的に特異的なタグを挿入し、そのタグを精製することでエクソソームを分泌した細胞を特定することを可能とすることである。すなわち、エクソソーム精製用マウスを作製し、評価することである。エクソソームは様々な細胞より分泌される脂質二重膜、表面抗原に覆われた小胞であり、その中には、mRNAやmiRNAなどが含まれており、最近では、がんのバイオマーカーとして的中率 90 % を超えるまでに至っている。エクソソーム表面に存在する表面抗原タンパクは、分泌した細胞により特異性があり、特にがん特異的な表面抗原タンパクなども知られている。その中でもほぼ全てのエクソソームに共通して存在することが知られているのが、テトラスパン (TN4) スーパーファミリーに属する CD9 である。
そこで、本研究計画では、CD9 の EC2 ドメインに FLAG-HA タグを時期および部位特異的に挿入するために、 loxp-FLAG-HA-loxP カセットを受精卵におけるゲノム編集によって挿入したマウスを作製し、時期・部位特異的なCreマウスと交配させることで、任意の時期・部位にのみCD9-FLAG-HAを発現するエクソソーム精製マウスを作製する 。
今年度はCD9領域にゲノム編集により二重鎖切断を導入するためのCas9のguideRNAの設計および評価を行った。また、ゲノム編集によりloxp-FLAG-HA-loxPカセットを導入するためのターゲッティングベクターの作製を行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
平成３０年度はCD9領域にゲノム編集により二重鎖切断を導入するためのCas9のguideRNAの設計および評価を行ない、また、ゲノム編集によりloxp-FLAG-HA-loxPカセットを導入するためのターゲッティングベクターの作製を終えたことから、計画通り進捗している。
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| 今後の研究の推進方策 |
令和元年度においては、昨年度に作製したguideRNAおよびターゲッティングベクターを用いてCd9-loxp-FLAG-HA-loxPノックインマウスを、マウス受精卵におけるゲノム編集により作製をする。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究所が移転のために動物実験を翌年度に行うこととしたことによる。
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