| 研究課題/領域番号 |
18K19315
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| 研究機関 | 国立医薬品食品衛生研究所 |
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研究代表者 |
小野 竜一 国立医薬品食品衛生研究所, 毒性部, 室長 (10401358)
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| 研究期間 (年度) |
2018-06-29 – 2022-03-31
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| キーワード | エクソソーム / 細胞外小胞 / EV |
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| 研究実績の概要 |
本研究課題の目的は、細胞外小胞として知られるエクソソーム表面に時期・部位特異的に特異的な表面タンパクを挿入し、その表面タンパクを精製することでエクソソームを分泌した細胞を特定することを可能とすることである。エクソソームは様々な細胞より分泌される脂質二重膜、表面抗原に覆われた小胞であり、その中には、mRNA や miRNA などが含まれており、最近ではがんのバイオマーカーとして的中率 90 % を超えるまでに至っている。エクソソーム表面に存在する表面抗原タンパク、分泌した細胞により特異性があり、特にがん特異的な表面抗原タンパクなども知られている。 その中でもほぼ全てのエクソソームに共通して存在することが知られているのが、テトラスパニン (TN4) スーパーファミリーに属する CD9 である。 そこで、本研究計画では、ヒト CD9 に EGFP の融合させた CD9-EGFP を時期および部位特異的に発現するトランスジェニックマウスを作製する。CD9-EGFP は、 Cre-loxP システムを利用することで、時期・部位特異的に CD9-EGFP を誘導することが可能となる。
昨年度までに、内在性の CD9 をゲノム編集により欠損させたマウスの作製を行い、CD9-EGFP トランスジェニックマウス作製用のベクターを構築している。今年度は、マウスES細胞に、CD9-EGFP トランスジェニックマウス作製用のベクターを導入し、それらのES細胞にさらにCre強制発現を導入した。
Cre発現時に、CD9-EGFPの発現の強いES細胞株のスクリーニングを行ない、ES細胞ぼ核型などを解析を行い、キメラマウス作成に用いるES細胞株３ラインの選択を行った。現在までに計１３匹のキメラマウスが作出され、トランスジェニックラインの単離を行なっっている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
コロナ禍もあり、マウスの作成が遅れてたがCreによる遺伝子発現誘導の確認されたトランスジェニックES細胞株の単離に成功し、キメラマウス作出にも成功するなど、順調に進捗している。
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| 今後の研究の推進方策 |
キメラマウスを野生型マウスと交配をし、トランスジェニックマウスラインの単離を行う。その後、各種Creトランスジェニックマウスと交配することで、臓器特異的なCD9-EGFPを誘導し、実際に採血を行い、CD9-EGFPを精製することで、臓器特異的なエクソソームの単離を確認する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナ禍によりトランスジェニックマウス作製が遅れたため。
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