研究課題
概日(サーカディアン)リズムを制御する中枢概日時計・視交叉上核(SCN)の神経ネットワークを題材にし、複雑な局所神経ネットワークにおいて、近接する2 種類のニューロンタイプに異なる遺伝子操作・神経活動操作を加え、両者間のコミュニケーションをex vivo、 in vivoで様々な角度から記録・解析できるシステムを構築する。具体的には、一方を刺激した時の他方の応答、両者の神経活動の同時測定、上流・下流関係の解析等である。そのためには、2種類のニューロンタイプに特異的に、異なる外来遺伝子を導入する必要がある。両者がある程度離れた領域に存在する場合には、Cre依存的 発現AAVベクターを空間的にインジェクションし分けることが可能である。しかしSCNは小さな神経核なので、AAVベクターを空間的に打ち分けることは不可能である。そこで本研究では、一方のニューロン(VIPニューロン)に特異的にテトラサイクリン制御性トランス活性化因子tTA2を発現するマウスを作製し(VIP- tTA2)、tTA2依存的発現AAVベクターを使ってVIPニューロンに外来遺伝子を発現させる。AVP-Creマウス/Cre依存的発現AAVと組み合わせれば、二種のAAVベクターを一緒にインジェクションすることで、両者に異なる遺伝子を導入できる。今年度は、VIP-tTA2マウスのファウンダーマウスが得られたので、系統を確立し、またtTA2発現を確認した。Avp-Creマウスとのダブルトランスジェニックマウスも得ている。さらに、tTA2依存的にjGCaMP7sやChR2::EYFPを発現する組換えAAVベクターを作成し、当該マウス・ベクターを用いたVIPニューロンの細胞内Ca2+のin vivo計測も開始した。
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