| 研究課題/領域番号 |
18K19624
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| 研究機関 | 国際医療福祉大学 |
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研究代表者 |
河村 和弘 国際医療福祉大学, 医学部, 教授 (10344756)
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| 研究分担者 |
佐藤 可野 国際医療福祉大学, 医学部, 助教 (00511073)
岡本 直樹 国際医療福祉大学, 医学部, 研究員 (80714360)
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| 研究期間 (年度) |
2018-06-29 – 2021-03-31
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| キーワード | ライブセルイメージング / 卵巣組織移植術 / 早発閉経 |
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| 研究実績の概要 |
卵巣組織移植は、卵子の源である卵胞を患者に移植する不妊治療法として、近年応募者が開発した早発閉経患者の卵胞活性化療法（後述）やがん患者の妊孕性温存療法における最重要技術である。しかし、患者の残存初期卵胞は卵巣組織内に均一分布せず、一部に集簇して存在している。現行の方法では、移植卵巣組織における卵胞の局在を知る術はなく、卵胞の有無が不明の組織を移植するしかなく、臨床成績に大きく影響する。もし細胞に障害を与えず初期卵胞の局在を可視化できれば、卵胞を含む組織を選択的に移植することが可能となり、卵巣移植術の技術革新がもたらされる。
本研究では細胞毒性が非常に少ない４種類の方法を用いて、生きたヒト初期卵胞を可視化する世界初の試みを行い、全く新しい卵巣移植術を確立して臨床成績の改善を目指す。既存の技術では、組織学的検査により卵巣組織内の卵胞は同定可能であるが、検査後は卵胞の生存性は望めず、その卵巣組織は移植に用いることができない。本研究により生きたヒト初期卵胞の可視化技術が開発されれば、この技術限界が突破される。さらに、ヒト初期卵胞を材料とする機能解析や発育制御に関する新しい研究が可能となり、生殖医療の発展に大きく貢献することが期待される。本研究では、光学技術を用いる方法、蛍光バイオイメージング法により、卵巣組織中の卵胞の可視化を試み、最良の方法を確立する。本年度は、5-アミノレブリン酸(5-ALA)を用いてマウス卵巣内の初期卵胞の検出を行い、その後、組織を固定して5μmの薄切標本をHE染色し、1mmの厚さの三次元像を構築して、組織学的に初期卵胞を描出した。現状で初期卵胞の検出にはまだ至っていないが、後期卵胞（胞状卵胞）の検出は可能となった。初期卵胞を検出可能な近赤外蛍光標識リガンドについて、初期卵胞に特異的に発現している受容体のリガンドをCH1055標識したものを作製した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度実施予定であった、蛍光バイオイメージング法を用いる方法である5-ALAを用いてマウス卵巣を撮影し、卵胞の検出に成功した。1000-1500nm波長域(NIR-II)近赤外蛍光標識リガンドによる初期卵胞検出のために、初期卵胞に特異的に発現している受容体のリガンドをCH1055標識したものを作製し、卵胞への結合を確認した。
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| 今後の研究の推進方策 |
5-ALAによる卵胞検出は、蛍光バックグラウンドがまだ高く、大型の後期卵胞は同定できるが、小さな初期卵胞の同定は難しく、さらなる至適化が必要と考えられた。また、NIR-II近赤外蛍光標識リガンドによる初期卵胞検出では、小さな初期卵胞の検出には、解像度の問題で現有の顕微鏡では難しく、特別な顕微鏡の導入を検討することとした。次年度には、これらの蛍光バイオイメージング法による初期卵胞の検出のためのプロトコールを至適化し、光学技術を用いる方法と併せて初期卵胞の卵胞の描出を試みる。また、最終的に確定した方法でイメージングを行った後のマウス卵巣組織をレシピエントマウスの腎皮膜下に移植し、移植卵巣から卵子を採取して体外受精胚移植を行い、その成績を撮影なしの対照群と比較して本法の安全性を検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
CH1055プローブで近赤外蛍光標識したリガンドによる初期卵胞検出は、その感度と解像度の問題から予想よりも高解像度の特殊な顕微鏡による検出系が必要となり、今年度は現有設備の顕微鏡を用いて比較的大きな胞状卵胞を標的とすることで、近赤外蛍光標識リガンドの有用性を確認した。そのため、本試験の主目的の１つである、初期卵胞に特異的に発現している受容体のCH1055標識リガンドを用いた初期卵胞の検出は、次年度以降に予算を持ち越して、特別な顕微鏡の導入を行った後で行う予定とした。
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