| 研究課題/領域番号 |
18K19715
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| 研究機関 | 広島文化学園大学 |
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研究代表者 |
讃井 真理 広島文化学園大学, 看護学部, 教授 (20412330)
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| 研究分担者 |
土肥 敏博 広島文化学園大学, 看護学部, 教授 (00034182)
森田 克也 広島文化学園大学, 看護学部, 教授 (10116684)
新川 雅子 広島文化学園大学, 看護学部, 准教授 (10711236)
鈴木 茂樹 東北大学, 大学病院, 講師 (30549762)
本山 直世 広島大学, 医系科学研究科(歯), 専門研究員 (70509661) [辞退]
酒井 規雄 広島大学, 医系科学研究科(医), 教授 (70263407)
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| 研究期間 (年度) |
2018-06-29 – 2021-03-31
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| キーワード | 難治性皮膚潰瘍 / 褥瘡 / TRPV3 / 褥瘡治療薬 / 予防法 |
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| 研究実績の概要 |
高齢者における皮膚潰瘍・褥瘡に対する効果的治療法・治療薬の開発が待たれている．本研究はTRPV3に焦点を当て，前年度，背部皮膚禅僧欠損創モデルでTRPV3 activators (2APB, カルバクロール)の創面塗布により, 肉芽形成の促進と明らかな創の収縮を認めた．
平成30年度は，マウスにおける難治性皮膚潰瘍・褥瘡モデルの作製およびTRPV3 activatorsの創傷治癒促進作用の詳細な検討を行った．背部皮膚全層欠損創モデルで，TRPV3 activators (2APB, カルバクロール，drofenin)の皮内投与は肉芽形成促進と血管新生をみとめたが，TRPV3 activators投与3－４日後より強い引っ掻き行動がみられ，創面の観察が困難になった．これらTRPV3 activatorsの作用はTRPV3 inhibitors (ruthenium red, 17R-resolvin D1, icilin)の皮内投与により減弱し，TRPV3が創傷治癒の促進におよび痒みの発症機構に寄与することが示唆された．TRPV3はリガンドの反復刺激により感作されることが知られており，TRPV3 activator皮内投与による引っ掻き行動はTRPV3の過剰活性化による可能性が示唆される．TRPV3 inhibitorが引っ掻き行動をより強く抑制する事実からも支持される．現在，TRPV3 activatorの適性濃度の検証，isopentenyl pyrophosphate等の内因性activatorや細胞内酸性化によるTRPV3活性化について検討を急いでいるところである．加えて，TRPV3 activators による肉芽形成と血管新生の亢進は，ADAM17によりectodomain sheddingをうける膜型細胞増殖因子や膜型サイトカインの関与を示唆する知見も得ている．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
昨年度７月の西日本豪雨災害により被災し，断水，停電，長期間の交通網の遮断等により，研究中の培養細胞が死滅，冷凍保存中の試薬・測定キットが失活してしまったことに加えて，新型コロナ感染症対策による人・モノの移動の自粛で長期間の研究中断を余儀なくされた．加えて，研究分担者の退職により，研究分担者資格を喪失したため，担当部分の研究遂行が難しくなった．このように研究開始直後から長期間研究が遂行できない時期が断続的に続き，研究が当初計画より遅れている．本研究を計画通り に遂行するためにも，研究期間の延長申請を行って実験を再開したところである．
現在、TRPV3 activators適性使用濃度などについて検証を急いでいる。難治性皮膚潰瘍・褥瘡及び皮膚欠損創の動物モデルがほぼ確立したことにより，組織傷害の進行を妨げるさまざまな治療法の動物実験が可能となり，治療効果のメカニズム解析が多面的に行う事ができると考えられる．
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| 今後の研究の推進方策 |
難治性皮膚潰瘍・褥瘡及び皮膚欠損創の動物モデルがほぼ確立したことにより，組織傷害の進行を妨げるさまざまな治療法の動物実験が可能となった．本モデルを使用してTRPV3アゴニストの有効性について明確にする．
TRPV3アゴニストの作用機序について①細胞増殖，②細胞分化・誘導，③細胞遊走に対する作用を検討する．加えて，④血管内皮細胞，血管平滑筋細胞の増殖，⑤組織液中への血管増殖因子の分泌について，肉芽組織におけるmRNAの発現解析，ELISAおよび免疫組織化学にて解析する．⑥毛細血管血流スコープによる血管新生の検証より，創傷における病態生理学的役割について明らかにする．
褥瘡等の難治性創傷の形成と組織傷害の進行に創面局所でのTRPV3の発現抑制或いは機能低下が原因ではないかとの作業仮設の基に，TRPV3発現の詳細な解析とTRPV3阻害物質の産生について検討する．①TRPV3発現抑制が明らかになれば，有害な環境刺激が遺伝子発現に持続的な変化をもたらすメカニズムとしてエピジェネティックな発現調節について発現誘導の時間経過などの多面的アプローチから明確にする．②TRPV3阻害物質についてはHaCat細胞を用いた細胞内Ca2+動態の推移で評価する．
難治性創傷の発症・進行は循環動態であったり感染や栄養等の全身状態であったりと非常に複雑であり，様々な因子を的確に判断してトータルなアプローチを行う必要がある．TRPV3が機能しやすい環境を整える．即ち充分な血行促進と保温効果のあるサプリメントや炎症の速やかな終結が期待できる薬物との併用による相乗効果について明らかにし，より効果的で適切な使用法，投与時期等についての理解を深める．
さらに，唾液中にTRPV3の生体内活性化物質が含まれる可能性について検証することで，難治性創傷の形成と発展におけるTRPV3の役割を明確にする．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
昨年度の西日本豪雨災害による被災による長期間の研究活動の中断に加えて，新型コロナ感染症の関連による度重なる実験・研究の中断．さらには，研究分担者の退職による研究分担者資格の喪失などにより，当初の実験計画より実施が遅れている．加えて，研究代表者の所属機関変更に伴う実験環境整備が必要となり，次年度使用額が生じた．
使用計画：創傷治癒に関係する様々な成長因子測定ELISAキット，ヒト由来ケラチノサイト，血管内皮細胞等の購入，TRPV3生体内活性化物質および阻害物質を含む各種薬物や実験動物の購入に使用する．
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