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2018 年度 実施状況報告書

妊娠糖尿病発症メカニズムを基盤とした疾患モデルマウスの開発

研究課題

研究課題/領域番号 18K19755
研究機関静岡県立大学

研究代表者

石川 智久  静岡県立大学, 薬学部, 教授 (10201914)

研究分担者 金子 雪子  静岡県立大学, 薬学部, 講師 (00381038)
研究期間 (年度) 2018-06-29 – 2021-03-31
キーワード妊娠糖尿病 / インスリン分泌 / 膵β細胞 / メラトニン受容体 / N‐アセチルセロトニン
研究実績の概要

メラトニンは、セロトニンからarylalkylamine N-acetyltransferase(AANAT)によるN-acetyl serotonin(NAS)の産生を経て、hydroxyindole O-methyltransferase(HIOMT)により生成される。膵β細胞において、セロトニンはインスリン分泌促進及び妊娠期における膵β細胞増殖に関与すること、また、セロトニンから変換され生成されるメラトニンもインスリン分泌調節に関わることが報告されている。そこで本研究では、膵β細胞におけるメラトニンシグナリングの意義を解明し、妊娠糖尿病との関連を明らかにすることを目的とした。
今年度は、C57BL/6Jマウス単離膵島およびβ細胞株INS-1細胞を用いて、NASが細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i)変化及びインスリン分泌に及ぼす効果、INS-1細胞におけるNASの生成について解析を行った。16.7 mMグルコース刺激により発生する[Ca2+]iオシレーションに対して、NASは濃度依存的に抑制した。グルコース誘発インスリン分泌も30 μM NAS処置により有意に抑制された。NASのこれらの作用は、非選択的メラトニン受容体阻害薬であるluzindoleにより抑制されたが、MT2受容体選択的阻害薬4-P-PDOTではluzindoleほどの抑制は認められなかった。以上より、膵β細胞において、NASは主にメラトニンMT1受容体を介してインスリン分泌を抑制することが示唆された。次に、膵β細胞におけるNASの合成を検討するため、HPLCを用いてINS-1細胞の培養上清中のNASを定量した。しかし、500 μMセロトニン存在下においても、INS-1細胞の培養上清中にNASを検出することはできなかった。すなわち、NASがINS-1細胞で生成されていることを支持する結果は得られなかった。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

初年度の検討により、以下のように、当初予想していたのとは異なる結果が得られている。まず、ゲノムワイド関連解析(GWAS)により見出された妊娠糖尿病患者におけるMTNR1B遺伝子の変異から、妊娠糖尿病ではメラトニンMT2受容体の発現が上昇することが示唆されていたことから、膵β細胞ではNASはMT2受容体アゴニストとして作用するという予想をしていたが、NASのインスリン分泌抑制効果は主にMT1受容体を介することが示唆された。そこで今後は、妊娠糖尿病ではMT2受容体の発現が上昇することをふまえて、MT2受容体を過剰発現させたβ細胞株を用いた検討を追加する。また、HPLCを用いてβ細胞株の培養上清中のNASの定量を行ったが、NASは検出できなかった。そこで、NASの前駆物質であるセロトニンを培養液に添加してみたが、それでもNASは検出できなかった。β細胞におけるNAS産生酵素であるAANATの発現は確認しているので、NAS産生のためには何らかの刺激が必要であると考え、現在、種々の刺激条件下におけるAANATの発現変化について検討している。以上のように、当初の研究計画とは部異なる点も出てきているが、新たな研究の発展が見込まれることから、おおむね順調に進展していると判断した。

今後の研究の推進方策

膵β細胞ではセロトニンからNASが生成され、オートクリンとしてメラトニンMT2受容体を活性化することでインスリン分泌を抑制するという機構の証明を引き続き目指す。並行して、この機構が妊娠糖尿病と関連する可能性について検証する。GWASにより見出された妊娠糖尿病患者におけるMTNR1B遺伝子の変異では、MT2受容体の発現が上昇することが示されている。膵β細胞においてNASがインスリン分泌抑制作用を示すことは証明できたが、通常状態では作用発現に高濃度を要し、さらに主に働くのはMT1受容体であることが示唆された。そこで、妊娠期には、NASのインスリン分泌抑制作用にMT2受容体が関与する可能性を検証する。妊娠期の膵β細胞におけるMT2受容体の発現の検討、セロトニン刺激によるMT2受容体発現の変動、及びINS-1細胞にMT2受容体を過剰発現させた時のNASの作用を検討する。また、β細胞株の培養上清中にNASが検出できなかったことから、NAS産生酵素であるAANATによるNAS産生には何らかの刺激が必要であると考え、種々の刺激条件下におけるAANATの発現変化を検討する。AANATの発現上昇が認められた条件下で、再度、HPLCを用いて、培養上清中のNASを検出する。さらに、妊娠期の膵β細胞におけるAANAT及びNASの発現変化を免疫染色及びウェスタンブロットにより解析するとともに、単離膵島ライセート中のNASをHPLCにより定量して、非妊娠期と比較する。以上より、膵β細胞におけるNASの生理学的意義の確立とともに、妊娠期におけるメラトニンシグナル関連分子の変化を調べることにより、NASの妊娠糖尿病との関連について検証する。

次年度使用額が生じた理由

注文した品の搬入遅延により、年度内の搬入が不可能となり、次年度に支払いを繰り越した。

  • 研究成果

    (20件)

すべて 2019 2018

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (15件) (うち国際学会 5件)

  • [雑誌論文] TRPV2 channels mediate insulin secretion induced by cell swelling in mouse pancreatic β-cells2019

    • 著者名/発表者名
      Sawatani Toshiaki、Kaneko Yukiko K.、Doutsu Isao、Ogawa Ai、Ishikawa Tomohisa
    • 雑誌名

      American Journal of Physiology-Cell Physiology

      巻: 316 ページ: C434~C443

    • DOI

      10.1152/ajpcell.00210.2017

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Alleviation of mechanical stress-induced allodynia by improving blood flow in chronic constriction injury mice2019

    • 著者名/発表者名
      Ishida Hirotake、Saito Shin-ya、Horie Ayaka、Ishikawa Tomohisa
    • 雑誌名

      European Journal of Pharmacology

      巻: 849 ページ: 67~74

    • DOI

      10.1016/j.ejphar.2019.02.002

  • [雑誌論文] Differential contribution of calcium channels to α 1 -adrenoceptor-mediated contraction is responsible for diverse responses to cooling between rat tail and iliac arteries2018

    • 著者名/発表者名
      Ishida Hirotake、Saito Shin-ya、Hishinuma Eita、Kitayama Tomoaki、Ishikawa Tomohisa
    • 雑誌名

      European Journal of Pharmacology

      巻: 826 ページ: 9~16

    • DOI

      10.1016/j.ejphar.2018.02.023

  • [雑誌論文] Concise synthesis of polymethoxyflavone sudachitin and its derivatives, and biological evaluations2018

    • 著者名/発表者名
      Sagara Hiroto、Kanakogi Masaki、Tara Yuki、Ouchi Hitoshi、Kimura Junko、Kaneko Yukiko、Inai Makoto、Asakawa Tomohiro、Ishikawa Tomohisa、Kan Toshiyuki
    • 雑誌名

      Tetrahedron Letters

      巻: 59 ページ: 1816~1818

    • DOI

      10.1016/j.tetlet.2018.03.064

  • [雑誌論文] α1A-Adrenoceptors, but not α1B- or α1D-adrenoceptors, contribute to enhanced contractile response to phenylephrine in cooling conditions in the rat tail artery2018

    • 著者名/発表者名
      Ishida Hirotake、Saito Shin-ya、Ishikawa Tomohisa
    • 雑誌名

      European Journal of Pharmacology

      巻: 838 ページ: 120~128

    • DOI

      10.1016/j.ejphar.2018.09.004

  • [学会発表] β細胞におけるDGKδ機能抑制による細胞増殖および糖尿病病態への効果の解析2018

    • 著者名/発表者名
      木村悠希、金子雪子、石川揚子、中山貴寛、石川智久
    • 学会等名
      第60回日本糖尿病学会年次学術集会
  • [学会発表] 膵β細胞におけるDGKαおよびγ機能抑制によるDAG蓄積は細胞内Ca2+濃度に対して二面性を示す2018

    • 著者名/発表者名
      澤谷俊明、金子雪子、石川智久
    • 学会等名
      第60回日本糖尿病学会年次学術集会
  • [学会発表] DAG accumulation due to type 1 DGK inhibition has contradictory dual effect on Ca2+ signaling in pancreatic β cells2018

    • 著者名/発表者名
      Toshiaki Sawatani, Yukiko Kaneko, Tomohisa Ishikawa
    • 学会等名
      American Diabetes Association 78th Scientific Sessions
    • 国際学会
  • [学会発表] Modulation of DDAH/ADMA/NOS pathway in pancreatic β-cells under diabetic condition.2018

    • 著者名/発表者名
      Yukiko Y Kaneko, Misaki Sano, Ami Morioka, Masato Nojiri, Nahoko Kasahara, Tomohisa Ishikawa
    • 学会等名
      18th World Congress of Basic and Clinical Pharmacology
    • 国際学会
  • [学会発表] TRPV2 channels mediate cell swelling-induced insulin secretion in mouse pancreatic β cells.2018

    • 著者名/発表者名
      Toshiaki Sawatani, Yukiko Kaneko, Isao Doutsu, Ai Ogawa, Tomohisa Ishikawa
    • 学会等名
      18th World Congress of Basic and Clinical Pharmacology
    • 国際学会
  • [学会発表] 膵β細胞においてI型ジアシルグリセロールキナーゼ機能低下はインスリン分泌を二面性に制御する2018

    • 著者名/発表者名
      澤谷俊明、金子雪子、石川智久
    • 学会等名
      生体機能と創薬シンポジウム2018
  • [学会発表] 膵β細胞におけるメラトニンシグナリング関連分子の発現および機能解析2018

    • 著者名/発表者名
      八木雄也、金子雪子、鴨志田ありさ、石川智久
    • 学会等名
      日本病院薬剤師会東海ブロック・日本薬学会東海支部合同学術大会 2018
  • [学会発表] 植物ポリフェノールの膵β細胞機能に対する効果の解析2018

    • 著者名/発表者名
      山本萌絵、金子雪子、多良勇輝、青柳有紀、秋山季理子、菅敏幸、石川智久
    • 学会等名
      日本病院薬剤師会東海ブロック・日本薬学会東海支部合同学術大会 2018
  • [学会発表] 膵β細胞におけるDGKδ機能抑制による糖尿病病態改善効果とそのメカニズムの解析2018

    • 著者名/発表者名
      松田有加里、金子雪子、木村悠希、石川揚子、中山貴寛、石川智久
    • 学会等名
      日本病院薬剤師会東海ブロック・日本薬学会東海支部合同学術大会 2018
  • [学会発表] Effects of citrus flavonoids on pancreatic β-cell function2018

    • 著者名/発表者名
      Yuki Tara, Yukiko Kaneko, Yuki Aoyagi, Megumi Kaji, Kiriko Akiyama, Toshiyuki Kan, Tomohisa Ishikawa
    • 学会等名
      The 4th International Conference on Pharma and Food
    • 国際学会
  • [学会発表] Diacylglycerol accumulation due to type-1 diacylglycerol kinase dysfunction has a dual response on insulin secretion in pancreatic β-cells2018

    • 著者名/発表者名
      Toshiaki Sawatani, Yukiko Kaneko, Tomohisa Ishikawa
    • 学会等名
      The 4th International Conference on Pharma and Food
    • 国際学会
  • [学会発表] DGKδ deficiency in mouse pancreatic β-cells improves STZ-induced hyperglycemia2018

    • 著者名/発表者名
      Yuki Kimura, Yukiko Kaneko, Taiji Sato, Chihiro Ishiwatari, Yoko Ishikawa, Yukari Matsuda, Tomohisa Ishikawa
    • 学会等名
      The 4th International Conference on Pharma and Food
  • [学会発表] マウス膵β細胞におけるDGKδ欠損はSTZ誘発糖尿病を改善する2018

    • 著者名/発表者名
      木村悠希、金子雪子、中山貴寛、石川揚子、松田有加里、青島育美、石川智久
    • 学会等名
      第92回日本薬理学会年会
  • [学会発表] 膵β細胞機能に対する柑橘類フラボノイドの作用2018

    • 著者名/発表者名
      金子雪子、石川智久
    • 学会等名
      第92回日本薬理学会年会
  • [学会発表] ノビレチンはインスリン分泌促進および膵β細胞保護作用により糖尿病を改善させる2018

    • 著者名/発表者名
      多良勇輝、金子雪子、山本萌絵、青柳有紀、秋山季理子、菅敏幸、石川智久
    • 学会等名
      日本薬学会第139年会

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公開日: 2019-12-27  

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