日本と近隣諸国間で行き来する輸入ウイルス感染症に対する迅速診断法の開発

2022 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 18KK0271
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 生田 和良 大阪大学, 微生物病研究所, 招へい教授 (60127181)
• 研究分担者: 池森 亮 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 研究員 (90827255) ; 佐々木 正大 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (20547533) ; 山元 誠司 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主任研究員 (20649008) ; 改田 厚 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主幹研究員 (50372131) ; 中田 恵子 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主任研究員 (50516747) ; 上林 大起 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主任研究員 (50622560) ; 倉田 貴子 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主幹研究員 (70435890) ; 青山 幾子 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 微生物部, 主幹研究員 (90332452) ; 本村 和嗣 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 公衆衛生部, 部長 (60450558)
• 研究期間 (年度): 2018-10-09 – 2023-03-31
• キーワード: 麻しんウイルス / 風しんウイルス / エンテロウイルス / SFTSウイルス / マウス単クローン抗体 / イムノクロマトキット / 迅速診断キット

研究実績の概要

新型コロナ収束に向けて国際間の人の移動が急拡大しており、海外からの輸入感染症の発生が懸念されている。本研究課題の目的は、東南アジアからの輸入感染症（麻疹、風疹、手足口病、重症熱性血小板減少症候群（SFTS)）の水際対策確立を目的として、それぞれの迅速診断キットを開発することである。これまでに得られている成果の状況は以下のとおりである。
麻疹および風疹：麻疹ウイルスNucleoprotein（MV-N）及び風疹ウイルスCapsid protein（RV-C）に対するマウス単クローン抗体及びウサギポリクローン抗体を作製した。イムノクロマト法による迅速診断キットの開発に適した麻しん及び風しんそれぞれに対する2種類の単クローン抗体（金コロイド結合用抗体Ａ、抗原と抗体Ａのコンプレックスの補足用抗体Ｂ）を選定した。大阪健康安全基盤研究所で保管していた麻しんの臨床検体（咽頭スワブ）を用いた場合の迅速診断が可能であったが、実用化には今後高感度系の開発が必要である。風疹患者からの風疹ウイルス排出量の推移を明らかにした。
手足口病：大阪健康安全基盤研究所で得られたエンテロウイルスA-71（EV-A71）の分離株を培養細胞、哺乳マウスで増やした後の精製ウイルス粒子で免疫し、これまでに数個の抗体産生株を得ている。WBとIFによるEV-A71株との特異性を確認した。現在までにモノクローナル抗体を濃縮・精製しイムノクロマトキットの作製を試みているが、感度不十分で実用性のあるキット作製には至っていない。
SFTS：大阪健康安全基盤研究所で分離したSFTSウイルスの2株（J1日本型、C5中国型）をマウス細胞株（B7)に順化し、感染B7細胞に不活化処理を実施し、マウスに免疫した。これまでにIF法でのスクリーニングで数クローンの特異抗体産生株を樹立している。現在までに、イムノクロマトキットを作製し、迅速診断可能なキット作製に成功している。現在、その感度と特異度について検討している。

研究成果

• [雑誌論文] Shedding of rubella virus in postsymptomatic individuals; viral RNA load is a potential indicator to estimate candidate patients excreting infectious rubella virus (2023)
  • 著者名/発表者名: Kanbayashi Daiki、Kurata Takako、Kaida Atsushi、Kubo Hideyuki、Yamamoto Seiji P.、Egawa Kazutaka、Hirai Yuki、Okada Kazuma、Kaida Yuko、Ikemori Ryo、Yumisashi Takahiro、Ito Ayami、Saito Takeshi、Yamaji Yoshihiko、Nishino Yuka、Omori Ryosuke、Mori Haruyo、Motomura Kazushi、Ikuta Kazuyoshi
  • 雑誌名: Journal of Clinical Virology 巻: 160 ページ: 105377
  • DOI: 10.1016/j.jcv.2022.105377
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Contribution of parvovirus B19 in suspected cases of measles/rubella in Osaka, Japan, between 2011 and 2021 (2023)
  • 著者名/発表者名: Kaida Yuko、Kanbayashi Daiki、Kurata Takako、Mori Haruyo
  • 雑誌名: Journal of Medical Virology 巻: 95 ページ: e28593
  • DOI: 10.1002/jmv.28593
  • 査読あり
• [雑誌論文] Establishment of measles virus receptor‐expressing Vero cells lacking functional poliovirus receptors (2023)
  • 著者名/発表者名: Someya Kenji、Okemoto‐Nakamura Yuko、Kurata Takako、Kanbayashi Daiki、Saito Noriko、Itamochi Masae、Otsuki Noriyuki、Hanada Kentaro、Takeda Makoto
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 巻: 67 ページ: 166～170
  • DOI: 10.1111/1348-0421.13047
  • 査読あり
• [雑誌論文] 風疹患者におけるウイルスRNAと感染性ウイルスの排出について (2023)
  • 著者名/発表者名: 上林大起 倉田貴子 改田 厚 久保英幸 山元誠司 江川和孝 平井有紀 岡田和真 改田祐子 池森 亮 弓指孝博 森 治代 本村和嗣 山地良彦 西野裕香 伊藤文美 齊藤武志 大森亮介 生田和良
  • 雑誌名: 病原微生物検出情報（IASR） 巻: 44 ページ: 7～9
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Increasing seroprevalence but waning herd immunity against measles after elimination: Longitudinal seroepidemiology of measles in Osaka Prefecture, Japan, 2003-2020 (2022)
  • 著者名/発表者名: Kurata Takako、Miyama Takeshi、Kanbayashi Daiki、Kaida Yuko、Aoyama Ikuko、Ikemori Ryo、Banno Fumiya、Kawahata Takuya、Mori Haruyo、Motomura Kazushi
  • 雑誌名: Vaccine 巻: 40 ページ: 6581～6588
  • DOI: 10.1016/j.vaccine.2022.07.025
  • 査読あり
• [雑誌論文] 大阪府におけるダニ媒介感染症について (2022)
  • 著者名/発表者名: 青山幾子
  • 雑誌名: ダニ研究 巻: 17 ページ: 26
  • 査読あり
• [雑誌論文] 大阪府における蚊媒介ウイルス感染症に対するサーベイランス調査（2021 年度） (2022)
  • 著者名/発表者名: 青山幾子，池森亮，横田正春，弓指孝博
  • 雑誌名: 大阪健康安全基盤研究所研究年報 巻: 6 ページ: 44～51
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] 大阪府におけるエンテロウイルス感染症の流行状況と分子疫学的解析（2021 年度） (2022)
  • 著者名/発表者名: 中田恵子，森治代
  • 雑誌名: 大阪健康安全基盤研究所研究年報 巻: 6 ページ: 20～26
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 大阪府において2010年度から2021年度に検出されたコクサッキーウイルスＡ４の分子疫学解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 中田恵子、山崎謙治
  • 学会等名: 第69回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] 大阪府におけるダニ媒介感染症 (2022)
  • 著者名/発表者名: 青山幾子、池森亮、弓指孝博
  • 学会等名: 第 74 回日本衛生動物学会大会ダニ類研究班
• [学会発表] 動物とペットの SFTS ～検査はどうする？ (2022)
  • 著者名/発表者名: 青山幾子
  • 学会等名: 令和 4 年度獣医学術近畿地区学会
• [学会発表] 大阪府内のマダニにおける SFTS ウイルスおよび紅斑熱群リケッチアの保有状況調査 (2022)
  • 著者名/発表者名: 池森亮、青山幾子、弓指孝博
  • 学会等名: 第 29 回ダニと疾患のインターフェイスに関するセミナー (SADI) 金沢大会
• [学会発表] 大阪府における SFTS の浸淫状況について (2022)
  • 著者名/発表者名: 青山幾子、池森亮、弓指孝博
  • 学会等名: 第 4 回 SFTS 研究会
• [学会発表] 大阪府における紅斑熱の今昔 (2022)
  • 著者名/発表者名: 青山幾子、池森亮、弓指孝博
  • 学会等名: 第 77 回日本衛生動物学会西日本支部大会
• [学会発表] 大阪府において 2010 年度から 2021 年度に検出されたコクサッキーウイルスＡ４の分子疫学解析 (2022)
  • 著者名/発表者名: 中田恵子、山崎謙治
  • 学会等名: 第 69 回日本ウイルス学会学術集会
• [学会発表] 地方衛生研究所から見る麻疹排除後の麻疹感染とアウトブレイク (2022)
  • 著者名/発表者名: 倉田貴子
  • 学会等名: 第63回日本臨床ウイルス学会
• [備考] 風しんを正しく診断するには？―検査・研究から明らかになったこと―
  • URL: http://www.iph.osaka.jp/s007/020/020/080/20230424153636.html
• [備考] マダニに注意！
  • URL: https://www.youtube.com/watch?v=aWKMlSpekWE
• [備考] アウトドア活動を行う際にはダニ媒介感染症の対策を！！
  • URL: http://www.iph.osaka.jp/s005/news_13.pdf
• [備考] マダニで感染？重症熱性血小板減少症候群(SFTS)について
  • URL: http://www.iph.osaka.jp/s007/020/030/020/190/20190614110809.html
• [備考] 野山に出かけるときはダニに注意しましょう！
  • URL: http://www.iph.osaka.jp/s007/020/030/020/180/20180515134139.html