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2007 年度 実績報告書

ヒト細胞におけるM期から複製開始にいたるまでの染色体構成因子のプロテオーム解析

研究課題

研究課題/領域番号 19038002
研究機関北海道大学

研究代表者

小布施 力史  北海道大学, 大学院・先端生命科学研究院, 教授 (00273855)

キーワードプロテオーム / 染色体 / 質量分析 / インフォマティクス / ヘテロクロマチン / 定量プロテオミクス / クロマチン / 細胞周期
研究概要

本課題は、ヒト染色体の構成因子の量的な変動を、質量分析をもちいたプロテオーム解析により網羅的に明らかすることを目的としている。18年度までに、質量分析、インフォマティックス技術について沖縄大学院大学先行事業の長尾博士と協力することにより向上したため、クロマチン構成蛋白質の精製度については意識せず、ラフな分画を解析に用いるのがよいと判断した。
本年度は、質量分析を用いた定量プロテオミクスにより、非同調、Thymidine blockでS期に同調した細胞、TNI6(微小管重合阻害剤)でM期に同調した細胞集団について、非イオン性の界面活性剤(0.1% Triton)を含む干渉液中で細胞を処理し、100mM NaCl存在下で可溶化するものを細胞質画分あるいは核質画分、100mM NaCl処理による不要画分に対して500mM NaCl存在下で可溶化するものを染色体結合画分、500mM NaCl処理による不要画分を核マトリクスなどを含む画分として、その構成要素を同定と同時に定量した。その結果、500種類以上の蛋白質を同定することができ、それぞれの蛋白質のデーターベース上のannotationから判断してそのうちの1/3以上が染色体構成蛋白質と考えられた。また、MCM、核膜孔蛋白質、ヒストンなど、これまでの文献報告と同様に細胞周期依存的な染色体との相互作用が定量プロテオミクス解析により得ることができた。しかしながら、S期、M期、非同調細胞の比較では、染色体上で機能する重要な新規因子を抽出するには情報量が少ないことが判明した。今後、M期同調からリリースした同調細胞集団を用いて、同様の解析を行い、MCMやコンデンシンのように、染色体上に多く存在し、染色体のダイナミクスを制御する因子の同定を行う必要がある。

  • 研究成果

    (19件)

すべて 2008 2007

すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (14件)

  • [雑誌論文] Diminishing HDACs by drugs or mutations promotes normal or abnormal sister chromatid separation by affecting APC/C and adherin.2008

    • 著者名/発表者名
      Kimata, Y.
    • 雑誌名

      J Cell Sci 121

      ページ: 1107-1118

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Human Blinkin/AF15q14 Is Required for Chromosome Alignment and the Mitotic Checkpoint through Direct Interaction with Bub1 and BubR12007

    • 著者名/発表者名
      Kiyomitsu, T.
    • 雑誌名

      Dev. Cell 13

      ページ: 663-676

    • 査読あり
  • [雑誌論文] alpha-Klotho as a regulator of calcium homeostasis2007

    • 著者名/発表者名
      Imura, A.
    • 雑誌名

      Science 316

      ページ: 1615-1618

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Helicobacter pylori CagA targets PAR-1/MARK kinase to disrupt epithelial cell polarity2007

    • 著者名/発表者名
      Saadat, I.
    • 雑誌名

      Nature 447

      ページ: 330-333

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Priming of Centromere for CENP-A Recruitment by Human hMis18α, β and M18BP2007

    • 著者名/発表者名
      Fujita, Y.
    • 雑誌名

      Dev. Cell 12

      ページ: 17-30

    • 査読あり
  • [学会発表] ヒト複製開始複合体ORCと相互作用する新規WD40タンパク質の機能解析2008

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      第25回染色体ワークショップ
    • 発表場所
      熱海
    • 年月日
      20080130-0201
  • [学会発表] ヒトヘテロクロマチンタンパク質HP1と相互作用する因子のプロテオミクス解析2008

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      第25回染色体ワークショップ
    • 発表場所
      熱海
    • 年月日
      20080130-0201
  • [学会発表] ヒトBlinkin/AF15q14はBub1, BubR1との相互作用を介して、スピンドルチェックポイントと染色体の整列に機能する2008

    • 著者名/発表者名
      清光智美
    • 学会等名
      第25回染色体ワークショップ
    • 発表場所
      熱海
    • 年月日
      20080130-0201
  • [学会発表] ヒトヘテロクロマチンタンパク質HP1と相互作用因子のプロテオミクス解析2008

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      第25回染色体ワークショップ
    • 発表場所
      熱海
    • 年月日
      20080130-0201
  • [学会発表] 出芽酵母CUL8, MMS1, MMS22の複合体形成の解析2007

    • 著者名/発表者名
      三村覚
    • 学会等名
      BMB2007
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      20071211-15
  • [学会発表] プロテオミクスによるヒトヘテロクロマチンタンパク質HP1と相互作用する因子の網羅的な解析2007

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      BMB2007
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      20071211-15
  • [学会発表] Rsf-1/RSF is implied in active establishment of CEMP-A chromatin2007

    • 著者名/発表者名
      依田欣哉
    • 学会等名
      BMB2007
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      20071211-15
  • [学会発表] ヒトヘテロクロマチンタンパク質HP1と相互作用因子のプロテオミクス解析2007

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      BMB2007
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      20071211-15
  • [学会発表] ヒトヘテロクロマチンタンパク質HP1と相互作用因子のプロテオミクス解析2007

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      第7回核ダイナミクス研究会
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      20070925-27
  • [学会発表] HP1はhMis12複合体の構成因子であるDC8との結合により染色体分配に必須な役割を果たす2007

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      第7回核ダイナミクス研究会
    • 発表場所
      札幌
    • 年月日
      20070925-27
  • [学会発表] Identification and characterization of novel human ORC binding proteins2007

    • 著者名/発表者名
      Obuse, C.
    • 学会等名
      CSHL meeting on Eukaryotic DNA replication & genome maintenance
    • 発表場所
      New York
    • 年月日
      20070905-09
  • [学会発表] Comprehensive proteomic analyses of human heterochromatin protein 1 (HP1) interacting2007

    • 著者名/発表者名
      Obuse, C.
    • 学会等名
      CSHL meeting on Eukaryotic DNA replication & genome maintenance
    • 発表場所
      New York
    • 年月日
      20070905-09
  • [学会発表] Involvement of human ORC and TRF2 in pre-replication comlex assembly at telomeres and telomere homeostasis2007

    • 著者名/発表者名
      Fujita, M.
    • 学会等名
      CSHL meeting on Eukaryotic DNA replication & genome maintenance
    • 発表場所
      New York
    • 年月日
      20070905-09
  • [学会発表] プロテオミクスによるヘテロクロマチン蛋白質を中心とした機能ネットワークの解明2007

    • 著者名/発表者名
      小布施力史
    • 学会等名
      第5回クロマチン・フロンティアーズ・ジャパン
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2007-11-19

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公開日: 2010-02-04   更新日: 2016-04-21  

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