| 研究概要 |
本年度の研究は「OMVがマクロファージ細胞内で病原蛋白質を輸送する。」という仮説の証明を第一の目的として行なわれた。又、いかなる細菌種でも解明されていないOMV産生制御機構の解明に取り組んだ。
マクロファージ細胞環境下で産生されるOMVのプロテオーム解析
OMVの構成タンパク質および内胞されるタンパク質を同定した。それらの中でサルモネラ病原性との関連が強く示唆されたタンパク質、PagC, OmpX, Spy, PgtEについて機能解析を行った。
Salmonella OMV関連タンパク質はマクロファージ細胞質に輸送される。
SCV内で生育するサルモネラが、PagC-OMVにより種々の蛋白質をマクロファージ細胞質に輸送する可能性をCya assayを導入して検討した。Cyaは百日咳菌のadenylate cyclase活性を有する毒素であり、真核細胞の細胞質内にのみ存在するカルモジュリン依存的にATPをcAMPに変換する。PagC-Cyaのfusion proteinを持つサルモネラをマクロファージに感染させ、cAMP量を測定した。その結果PagCはマクロファージ細胞内へ輸送されることが明らかとなった。宿主の高次機能との相互作用を引き起こす種々の病原タンパク質がPagC-OMVによりマクロファージ細胞質へ輸送されると考えられる。
PagC-OMVの産生制御
サルモネラがマクロファージファゴソーム環境シグナルを感知してPagC産生を誘導しPagC-OMVを放出すること、さらにAAA+protease memberのClpXPがPagC-OMV量を厳密に制御することを見出した。ClpXPは、PagC precursorの細胞内安定性を制御していることを明らかにした。
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