| 研究概要 |
熱帯熱マラリアゲノム情報が明らかとなった今、マラリア感染者に防御抗体を誘導する原虫抗原タンパク質を同定することができれば、新規マラリアワクチン開発の突破口となると考えられる。そこで申請者らは、コムギ胚芽無細胞タンパク質合成法を用いて、マラリア原虫cDNAライブラリーからプロテインアレイを作製し、少量のマラリア流行地住民血清で実施可能なハイスループットなワクチン候補抗原スクリーニング手法を開発することを目的に本研究を実施した。
1.熱帯熱マラリア原虫の完全長cDNAライブラリーの作製
熱帯熱マラリア原虫培養株から完全長cDNAライブラリーを作製した。得られたライブラリーからランダムに1万クローンを選抜し、マラリアゲノムデータベースを参考に、各クローンに含まれている遺伝子を同定しデータベース化した。その結果、現在までに約1,200個の独立した原虫cDNAが確認された。
2.コムギ胚芽無細胞系を用いたハイスループットなビオチン化プロテインアレイの作製
メロゾイト期原虫のプロテインアレイを作製するため、上記cDNAクローンから、コムギ無細胞タンパク質合成法を改変してビオチン化組換えタンパク質をハイスループットに合成出来る系を確立した。
3.アルファ・スクリーン法を用いたマラリアワクチン候補抗原のスクリーニング系の確立
高感度、小スケール、ハイスループットな抗原抗体反応測定系を作成するため、アルファ・スクリーン法と上記無細胞ビオチン化組換えタンパク質合成法を組み合わせて、スクリーニング系を作成した。少数の既知抗原をモデルとして、この系の有用性を検討し、測定系としての至適化が完了した。
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