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COP1は癌抑制蛋白質p53の分解制御に、Cul4複合体はヌクレオチド除去修復とDNA複製のライセンシング制御に重要な働きをするユビキチンリガーゼである。本研究ではこれらの上流で働く調節因子COP9シグナロソーム(CSN)を含めた、COP1-Cul4-CSN制御系に着目し、この制御系の中で、まったく異なったユビキチンリガーゼ間のクロストークを検証し、細胞周期制御とチェックポイント制御における機能の解明を目指した。
(1)CSN3-COP1経路の解析
COP9シグナロソーム(特に第3サブユニット、CSN3)とCOP1の直接の結合を検証したが認められなかった。そこで、CSN3とCOP1の新規相互作用因子(それぞれCSN3BPとCOP1BP)を酵母のツーハイブリッド法を利用して網羅的に単離した。
(2)CSN-Cul4経路の解析
Cul4を認識する良い抗体がないため、大腸菌を利用して組み換えタンパク質を発現、精製しウサギに免疫することにより、Cul4を特異的に認識する抗体を得た。
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