| 研究概要 |
本申請では、「メダカを用いた個体・組織レベルでの機能解析系の確立」を目指している。逆遺伝学的手法を確立し、ここで得られた変異個体をベースに、別途確立する組織特異的遺伝子発現系により組織特異的に当該遺伝子発現の制御を行い、組織間・異なるタイプの細胞間での遺伝子機能の違い、その最終生物作用の違いを解析する、というのが基本戦略である。本年度は、基本となる逆遺伝学的手法の確立において大きな成果を得た。逆遺伝学的手法として、TILLING法によるメダカ変異体スクリーニングを行っているが,PCR増幅産物中に存在する変異を、Tm値の違いとして、HRM (Hi-Res Melting・融解温度曲線分析)法により検出する(Light Scanner, Idaho Tech.)新たな変異検出法を確立した。これにより,極めてハイスループットに,しかも低コストでの変異体取得が可能になった。本法により、ATM, ATR, Rb, p53の変異体を同定できた。現在これらの変異体について,野生株とバッククロスする事により想定外の導入変異を除去するとともに,ホモ個体の樹立を行っている。これらの変異体の表現型解析を行うとともに,更に損傷応答に重要な役割を果たす他の遺伝子群についてスクリーニングを試みる。また,組織特異的遺伝子発現系の確立については,基本となるBACの改変技術(recombineringの手法)を確立するとともに、赤外レーザを用いたヒートショックプロモーターによる遺伝子発現制御の基本的手法を確立した。上記逆遺伝学的手法で得られた変異体をベースに,組織特異的遺伝子発現系構築の為の技術的基盤が整備できた。
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