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本研究は1型ホスファターゼ(PP1)の機能の解明と基質の同定を行うために、PP1阻害剤トウトマイセチンおよび質量分析機などを用いて解析した。その中で、本年度は以下の事が明らかとなった。(1)様々な抗リン酸化抗体による実験結果から、2A型ホスファクーゼ(PP2A)が、細胞内のほとんど全てのリン酸化セリン・スレオニンを基質とするのに対して、PP1は基質特異性が大きい。(2)リン酸化親和性カラムの安定した自作が困難であり、またリン酸化親和性カラムでは40kDa以下のタンパク質の収率が極端に小さい。(3)トウトマイセチンで処理した細胞ではサイトカインTNFによる転写因子NF-κBの活性化が抑制される。この事実は、トウトマイセチンがNF-κBの上流であるキナーゼIKKの活性化を抑制する事を示している。またIKKとPP1は恒常的に結合しており、TNF刺激後はIKKの活性の減少と同様な時間経過での受容体へのPP1の結合と解離が観察された。このことからPP1はTNF/NF-κB経路の受容体付近に基質タンパク質をもっており、PP1はTNF/NF-κB経路を正に制御していると示唆される。(4)様々なシグナル伝達系路を調べた結果、PP1はDNA修復および細胞周期制御に重要なATMの基質を脱リン酸化することが示唆された。ATMの基質で有名な分子はp53であるが、本研究では異なった分子が見出され、リン酸化の部位も推定された。
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