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2010 年度 実績報告書

発光性アプタマーを用いる異常プリオンタンパク質の新検査法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 19209020
研究機関長崎大学

研究代表者

甲斐 雅亮  長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (00160953)

キーワードプリオン / アプタマー / 感染症 / 核酸 / タンパク質 / 発光検出 / マイクロアレイ / 物理化学的性質
研究概要

クロイツフェルト・ヤコブ病や牛海綿状脳症(狂牛病)などのプリオン病は、正常なプリオンタンパク質(PrP^C)が構造的に変化し、プロテアーゼ抵抗性の異常プリオンタンパク質(PrP^<Sc>)が生成・凝集することで発症すると考えられている。この異常PrPの新検査法を開発するために、プロテアーゼ抵抗性マウスプリオンタンパク質(mPrP^<Res>)の作製とDNAアプタマーを用いたmPrPの検出を行った。精製したmPrP^CとCuCl_2を混合し、4℃で静置することで、proteinase K分解に対して抵抗性を示すmPrP^<Res>を作製した。次に、mPrP^CとmPrP^<Res>をPVDF膜上に固定化後、mPrP^Cを認識するDNAアプタマーと結合反応を行ない、mPrPと結合したアプタマーを検出した。研究代表者が開発した化学発光試薬(TMPG)を用いてアプタマーを化学発光検出したところ、膜上のmPrP^Cのみが検出できた。この結果は、アプタマーによって立体構造の異なるPrPを特異的に認識できることを示唆するものである。今後、PrP^<Sc>やPrP^<Res>に対するアプタマーを開発し、異常プリオンタンパク質の特異的な検出法を開発する予定である。
次に、PrPの高感度検出を目的として、研究代表者が開発した高分子プローブ(HRP標識ビオチン化デキストランプローブ)と抗体を用いて、膜上のmPrP^Cを検出できるか調べた。抗PrP抗体を一次抗体として、ビオチン化二次抗体と高分子プローブを用い、使用する試薬の種類や濃度、洗浄条件などを検討した結果、1ngのmPrP^Cを検出することができた。この高分子プローブは、抗体以外にもビオチン化分子の検出に応用できるので、このプローブとビオチン化アプタマーを組み合わせたPrPの超高感度検出法の開発を行なう予定である。

  • 研究成果

    (24件)

すべて 2011 2010 その他

すべて 雑誌論文 (7件) (うち査読あり 7件) 学会発表 (13件) 図書 (1件) 備考 (1件) 産業財産権 (2件)

  • [雑誌論文] Aptamer-barcode based immunoassay for the instantaneous derivatization chemiluminescence detection of IgE coupled to magnetic beads.2011

    • 著者名/発表者名
      Qianwen Peng
    • 雑誌名

      Analyst

      巻: 136 ページ: 140-147

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Alginic acid-based macromolecular chemiluminescent probe for universal protein assay on a solid-phase membrane.2010

    • 著者名/発表者名
      Tomasz Krawczyk
    • 雑誌名

      Analyst

      巻: 135 ページ: 2894-2900

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Selective and facile assay of human immunodeficiency virus protease activity by a novel fluorogenic reaction.2010

    • 著者名/発表者名
      Zhiqiang Yu
    • 雑誌名

      Anal.Biochem

      巻: 397 ページ: 197-201

    • 査読あり
  • [雑誌論文] G-rich sequence-functionalized polystyrene microsphere-based instantane ous derivatization for the chemiluminescent amplified detection of DNA.2010

    • 著者名/発表者名
      Liang Xin
    • 雑誌名

      Luminescence

      巻: 25 ページ: 336-342

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Aptamer-mediated chemiluminescence detection of prion protein on a membrane using trimethoxyphenylglyoxal.2010

    • 著者名/発表者名
      Md Towhid Hossain
    • 雑誌名

      Anal.Sci

      巻: 26 ページ: 645-647

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Mechanisms of L-DOPA-induced cytotoxicity in rat adrenal pheochromocytoma cells : implication of oxidative stress-related kinases and cyclic AMP.2010

    • 著者名/発表者名
      Jin CM
    • 雑誌名

      Neuroscience

      巻: 170 ページ: 390-398

    • 査読あり
  • [雑誌論文] A novel and specific fluorescence reaction for uracil.2010

    • 著者名/発表者名
      Takayuki Shibata
    • 雑誌名

      Anal.Chim.Acta

      巻: 674 ページ: 234-238

    • 査読あり
  • [学会発表] 3,4-dihydroxyphenylacetic acidを用いたペプチドの蛍光検出法2011

    • 著者名/発表者名
      Hasina Yasmin
    • 学会等名
      日本薬学会第131年会
    • 発表場所
      静岡市
    • 年月日
      2011-03-29
  • [学会発表] ペプチド選択的な蛍光反応のカスパーゼ活性測定への応用2011

    • 著者名/発表者名
      Rahman Md.Shafikur
    • 学会等名
      日本薬学会第131年会
    • 発表場所
      静岡市
    • 年月日
      2011-03-29
  • [学会発表] ウラシル特異的蛍光誘導体化反応を用いた尿中ウラシルのハイスループット定量法2011

    • 著者名/発表者名
      藤田順也
    • 学会等名
      日本薬学会第131年会
    • 発表場所
      静岡市
    • 年月日
      2011-03-29
  • [学会発表] プリオンタンパク質の溶解性における銅イオンの影響2010

    • 著者名/発表者名
      室田紗由美, et al
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      20101200
  • [学会発表] TMPG反応を用いた膜上テロメアDNAの高感度検出法の開発2010

    • 著者名/発表者名
      山筋睦美
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] 特異的蛍光誘導体化反応による尿中ウラシルの定量2010

    • 著者名/発表者名
      藤田順也
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] Assay method for caspase activity with a selective fluorescence reaction for peptides2010

    • 著者名/発表者名
      唐辰虹
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] Alkaline phosphatase-labelled chemiluminescent probe for sensitive immunoassay of proteins on a solid-phase membrane2010

    • 著者名/発表者名
      Md.Golam Azam
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] ルミノールを基本骨格とする新規化学発光ラベル化剤2010

    • 著者名/発表者名
      吉村裕紀
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] HIVプロテアーゼを認識するアプタマーの探索2010

    • 著者名/発表者名
      河井健真
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] 人工siRNAによるHIVプロテアーゼの発現阻害2010

    • 著者名/発表者名
      長谷康志
    • 学会等名
      第27回日本薬学会九州支部大会
    • 発表場所
      長崎市
    • 年月日
      2010-12-11
  • [学会発表] Aptamer-mediated chemiluminescence detection of prion protein using trimethoxyphenylglyoxal on membrane2010

    • 著者名/発表者名
      Hossain Md.Towhid
    • 学会等名
      第23回バイオメディカル分析科学シンポジウム
    • 発表場所
      宮城県宮城郡松島町
    • 年月日
      2010-07-22
  • [学会発表] 新規ペプチド蛍光誘導体化反応を基にしたウイルス識別法の開発2010

    • 著者名/発表者名
      椛島力
    • 学会等名
      第23回バイオメディカル分析科学シンポジウム
    • 発表場所
      宮城県宮城郡松島町
    • 年月日
      2010-07-22
  • [図書] 薬学物理化学[第5版](第5章 電解質溶液pp79-98)2010

    • 著者名/発表者名
      甲斐雅亮、椛島力(小野行雄編集)
    • 総ページ数
      379
    • 出版者
      廣川書店
  • [備考]

    • URL

      http://www.ph.nagasaki-u.ac.jp/lab/function/index-j.html

  • [産業財産権] ペプチドの検出方法2011

    • 発明者名
      甲斐雅亮, 椛島力, 柴田孝之
    • 権利者名
      長崎大学
    • 産業財産権番号
      特願2011-045491
    • 出願年月日
      2011-03-02
  • [産業財産権] 2環状シトシン誘導体含有人工二本鎖核酸2011

    • 発明者名
      甲斐雅亮, 柴田孝之, 椛島力
    • 権利者名
      長崎大学
    • 産業財産権番号
      特願2011-045485
    • 出願年月日
      2011-03-02

URL: 

公開日: 2012-07-19  

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