発光性アプタマーを用いる異常プリオンタンパク質の新検査法の開発

2010 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19209020
• 研究種目: 基盤研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 甲斐 雅亮 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (00160953)
• 連携研究者: 椛島 力 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (20274673) ; 柴田 孝之 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教 (10448491)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2010
• キーワード: プリオン / アプタマー / 感染症

研究概要

本研究は、プリオン病の原因と考えられている異常プリオンタンパク質の高感度で簡便な新規検出法の開発を目的としている。そこで、正常プリオンタンパク質の大腸菌での発現とアフィニティーカラムによる精製を行ない、この正常プリオンタンパク質をもとに、プロテアーゼ分解に対して抵抗性を示すプリオンタンパク質を作製した。次に、核酸であるアプタマーと化学発光試薬、または、高分子プローブを用いることで、膜上に吸着させたプリオンタンパク質の高感度かつ特異的な検出法を開発した。

研究成果

• [雑誌論文] Aptamer-barcode based immunoassay for the instantaneous derivatization chemiluminescence detection of IgE coupled to magnetic beads. (2011)
  • 著者名/発表者名: Peng Q, Cao Z, Lau C, Kai M, Lu J.
  • 雑誌名: Analyst 136 ページ: 140-147
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alginic acid-based macromolecular chemiluminescent probe for universal protein assay on a solid-phase membrane. (2010)
  • 著者名/発表者名: Krawczyk T, Kondo M, Azam MG, Zhang H, Shibata T, Kai M.
  • 雑誌名: Analyst 135 ページ: 2894-2900
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selective and facile assay of human immunodeficiency virus protease activity by a novel fluorogenic reaction. (2010)
  • 著者名/発表者名: Yu Z, Kabashima T, Tang C, Shibata T, Kitazato K, Kobayashi N, Lee MK, Kai M.
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 397 ページ: 197-201
  • 査読あり
• [雑誌論文] G-rich sequence-functionalized polystyrene microsphere-based instantaneous derivatization for the chemiluminescent amplified detection of DNA. (2010)
  • 著者名/発表者名: Xin L, Cao Z, Lau C, Kai M, Lu J.
  • 雑誌名: Luminescence 25 ページ: 336-342
  • 査読あり
• [雑誌論文] Aptamer-mediated chemiluminescence detection of prion protein on a membrane using trimethoxyphenylglyoxal. (2010)
  • 著者名/発表者名: Hossain MT, Shibata T, Kabashima T, Kai M.
  • 雑誌名: Anal.Sci. 26 ページ: 645-647
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mechanisms of L-DOPA-induced cytotoxicity in rat adrenal pheochromocytoma cells : implication of oxidative stress-related kinases and cyclic AMP. (2010)
  • 著者名/発表者名: Jin CM, Yang YJ, Huang HS, Kai M, Lee MK.
  • 雑誌名: Neuroscience 170 ページ: 390-398
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel and specific fluorescence reaction for uracil. (2010)
  • 著者名/発表者名: Shibata T, Kawasaki SY, Fujita JY, Kabashima T, Kai M.
  • 雑誌名: Anal.Chim.Acta 674 ページ: 234-238
  • 査読あり
• [雑誌論文] Facile detection of proteins on a solid-phase membrane by direct binding of dextran-based luminol-biotin chemiluminescent polymer. (2009)
  • 著者名/発表者名: Zhang H, Shibata T, Krawczyk T, Kabashima T, Lu J, Lee MK, Kai M.
  • 雑誌名: Talanta 79 ページ: 700-705
  • 査読あり
• [雑誌論文] Label-free aptamer-based chemiluminescence detection of adenosine. (2009)
  • 著者名/発表者名: Yan X, Cao Z, Kai M, Lu J.
  • 雑誌名: Talanta 79 ページ: 383-387
  • 査読あり
• [雑誌論文] Diimine ligand as a novel chemiluminescence enhancer of luminol-containing compounds. (2009)
  • 著者名/発表者名: Smanmoo C, Yamasuji M, Sagawa T, Shibata T, Kabashima T, Yuan DQ, Fujita K, Kai M.
  • 雑誌名: Talanta 77 ページ: 1761-1766
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chemiluminescence platforms in immunoassay and DNA analyses. (2009)
  • 著者名/発表者名: Fan A, Cao Z, Li H, Kai M, Lu J.
  • 雑誌名: Anal.Sci. 25 ページ: 587-597
  • 査読あり
• [雑誌論文] Facile assay of telomerase activity utilizing a DNA-detectable chemiluminogenic reagent. (2008)
  • 著者名/発表者名: Tonooka K, Kabashima T, Shibata T, Tang C, Yu Z, Kai M.
  • 雑誌名: Anal.Sci. 24 ページ: 471-475
  • 査読あり
• [雑誌論文] Induction of dopamine biosynthesis by 1-DOPA in PC12 cells : implications of L-DOPA influx and cyclic AMP. (2008)
  • 著者名/発表者名: Jin CM, Yang YJ, Huang HS, Lim SC, Kai M, Lee MK.
  • 雑誌名: Eur.J.Pharmacol. 591 ページ: 88-95
  • 査読あり
• [雑誌論文] A selective fluorescence reaction for peptides and chromatographic analysis. (2008)
  • 著者名/発表者名: Kabashima T, Yu Z, Tang C, Nakagawa Y, Okumura K, Shibata T, Lu J, Kai M.
  • 雑誌名: Peptides 29 ページ: 356-363
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fluorescence detection of amino acids in the postcleavage conversions for manual sequencing of a peptide. (2008)
  • 著者名/発表者名: Wainaina MN, Shibata T, Smanmoo C, Kabashima T, Kai M.
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 374 ページ: 423-425
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dextran-based polymeric chemiluminescent compounds for the sensitive optical imaging of a cytochrome p450 protein on a solid-phase membrane. (2007)
  • 著者名/発表者名: Zhang H, Smanmoo C, Kabashima T, Lu J, Kai M.
  • 雑誌名: Angew.Chem.Int.Ed.Engl. 46 ページ: 8226-8229
  • 査読あり
• [雑誌論文] Facile determination of DNA-binding nuclear factor-kappaB by chemiluminescence detection. (2007)
  • 著者名/発表者名: Tonooka K, Kabashima T, Yamasuji M, Kai M.
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 364 ページ: 30-36
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cerium complexes of cyclodextrin dimers as efficient catalysts for luminol chemiluminescence reactions. (2007)
  • 著者名/発表者名: Yuan DQ, Lu J, Atsumi M, Yan JM, Kai M, Fujita K.
  • 雑誌名: Org.Biomol.Chem. 5 ページ: 2932-2939
  • 査読あり
• [学会発表] プリオンタンパク質の溶解性における銅イオンの影響 (2010)
  • 著者名/発表者名: 室田紗由美, et al
  • 学会等名: 第27回日本薬学会九州支部大会
  • 発表場所: 長崎市
  • 年月日: 20101200
• [学会発表] Alkaline phosphatase-labelled chemiluminescent probe for sensitive immunoassay of proteins on a solid-Phase membrane (2010)
  • 著者名/発表者名: Golam Azam, et al
  • 学会等名: 第27回日本薬学会九州支部大会
  • 発表場所: 長崎市
  • 年月日: 20101200
• [学会発表] Aptamer-mediated chemiluminescence detection of prion protein using trimethoxyphenyl glyoxal on membrane (2010)
  • 著者名/発表者名: Hossain Md.Towhid, et al
  • 学会等名: 第23回バイオメデイカル分析科学シンポジウム
  • 発表場所: 宮城県宮城郡松島町
  • 年月日: 20100700
• [学会発表] 高感度化学発光イメージングのための酵素的デキストランプローブ (2010)
  • 著者名/発表者名: Golam Azam, et al
  • 学会等名: 日本薬学会第130年会
  • 発表場所: 岡山市
  • 年月日: 20100300
• [学会発表] New tools for the research on HIV and prion diseases (2009)
  • 著者名/発表者名: Masaaki Kai
  • 学会等名: The second Asia symposium on pharmaceutical sciences in Nagasaki
  • 発表場所: 長崎市
  • 年月日: 20090300
• [学会発表] Development of simple method for DNA aptamer against protein (2009)
  • 著者名/発表者名: Hossain Md.Towhid, et al
  • 学会等名: The second Asia symposium on pharmaceutical sciences in Nagasaki
  • 発表場所: 長崎市
  • 年月日: 20090300
• [学会発表] Application of DNA detectable chemiluminogenic reagent (TMPG) to telomerase assay (2008)
  • 著者名/発表者名: Tsutomu Kabashima, et al
  • 学会等名: Pure and applied chemistry international conference 2008
  • 発表場所: バンコク(タイ)
  • 年月日: 20080100
• [学会発表] Expression of mouse prion protein in E.coli to develop aptamer (2007)
  • 著者名/発表者名: Kenji Koba, et al
  • 学会等名: International conference in structural biology
  • 発表場所: 香港(中国)
  • 年月日: 20071100
• [図書] 薬学物理化学[第5版] (2010)
  • 著者名/発表者名: 小野行雄編集
  • 総ページ数: 79-98
  • 出版者: 廣川書店
• [備考] ホームページ等
  • URL: http://www.ph.nagasaki-u.ac.jp/lab/function/index-j.html
• [産業財産権] ペプチドの検出方法 (2011)
  • 発明者名: 甲斐雅亮、椛島力、柴田孝之
  • 権利者名: 長崎大学
  • 産業財産権番号: 特許,特願2011-045491
  • 出願年月日: 2011-03-02
• [産業財産権] 2環状シトシン誘導体含有人工二本鎖核酸 (2011)
  • 発明者名: 甲斐雅亮、柴田孝之、椛島力
  • 権利者名: 長崎大学
  • 産業財産権番号: 特許,特願2011-045485
  • 出願年月日: 2011-03-02
• [産業財産権] ウイルスの識別方法 (2010)
  • 発明者名: 甲斐雅亮、椛島力
  • 権利者名: 長崎大学
  • 産業財産権番号: 特許,特願2010-047640
  • 出願年月日: 2010-03-04
• [産業財産権] ウラシル特異的な蛍光検出反応及びジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼ欠損症の検査法 (2010)
  • 発明者名: 甲斐雅亮、柴田孝之
  • 権利者名: 長崎大学
  • 産業財産権番号: 特許,特願2010-044610
  • 出願年月日: 2010-03-01
• [産業財産権] Luminescent polymer and use there of in bioassay (2008)
  • 発明者名: 甲斐雅亮
  • 権利者名: 長崎大学
  • 産業財産権番号: 特許,4193055
  • 取得年月日: 2008-10-03