| 研究課題/領域番号 |
19209038
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
工藤 純 慶應義塾大学, 医学部, 准教授 (80178003)
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| 研究分担者 |
渋谷 和憲 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (90296723)
堺 弘介 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (70245463)
池野 正史 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (80298546)
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| キーワード | ダウン症 / ヒト21番染色体 / 疾患モデルマウス / HAC / BAC / マウス16番染色体 / トリソミー21 / 顕微注入法 |
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| 研究概要 |
本研究においては、申請者等が10数年来磨き抜いたヒト21番染色体の遺伝子地図と、近年開発されたヒト人工染色体(HAC)ベクターを駆使して、新規ダウン症モデルマウスを作製することを試みた。
1.ヒト21番染色と相同なマス16番染色由来BACクローンの選定
工藤等は候補遺伝子の全長を含むBACクローンをデータベースの情報から選択し、BACのDNAを精製し、ゲノムシーケンスと比較して、欠失・挿入の有無等を精査してから、研究分担者の池野に渡した。
2.ヒト人工染色体(HAC)の作製
池野は、独自に開発したHAC基本ベクターの特異的挿入部位に任意のBACを部位特異的組換えを利用して導入するシステムを用いてBACクローンを含むHACを保有するマウスES細胞を作製した。すなわちRed/ET相同組み換えを利用して、大腸菌内のBACベクターにlox66組換え部位配列を組み入れた後、BACのDNAを精製し、マウスES細胞TT2F (B6/CBA1)に保持させたHAC基本ベクターのlox71組換え部位配列にCre/lox配列特異的組換えを利用して導入した。
3.HAC保有マウスの作製
堺等は常法に従い、このHACを保有するマウスES細胞を8細胞期のマウス胚と融合させてキメラマウスの作製を試みた。また、作出したHAC保有マウスは純系マウスとの戻し交配を行った。
4.HAC顕微注入法の開発
池野・堺等はHACをショ糖密度勾配遠心法等を用いて通常の染色体と分画し、マウス受精卵の前核への顕微注入を試みたが、精製度が足りず、まだ個体の作出には成功していない。
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