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単環性芳香族化合物合成のSA-PKSとして、Aspergillus terreus由来6-メチルサリチル酸(6MSA)合成酵素ATXについて引き続き検討した。ATX触媒ドメイン変異体の酵母内での発現において、KRドメイン変異体はトリケタイド中間体が環化したtriacetic acid lactone(TAL)を合成したが、DH-KR共変異体はTALを合成しなかったことから、DHドメインは中間体の脱水以外の反応を触媒する可能性が示唆された。そこで、DHとその下流に位置するID領域のみからなるポリペプチドATXDHを、全長のDH変異体とともに酵母内で共発現させたところ、形質転換酵母による6-メチルサリチル酸の生成が確認された。また、大腸菌で発現したATXDHとDH変異体のin vitro反応においても、ATXDHが独立したタンパクとして機能することを確認した。現在、ATXDHタンパクの精製、さらなる機能解析を進めている。また、全長のATXタンパクを活性酵素として発現、アフィニティーカラムで精製する系を確立し、ATXDHとともに、結晶化に向けた大量調製についても検討中である。多環性芳香族化合物生成のAR-PKSについては、ヘプタケタイドナフトピロン合成酵素であるAlb1と相同性の高いWangiella dermatidis菌由来のWdPKSについて、その異種糸状菌での発現を検討し、これがヘキサケタイドであるアセチルテトラヒドロキシナフタレン合成酵素であることを確認した。AR-PKSの炭素鎖長制御機構解明のための新しい対象を得ることができた。還元型ポリケタイドを精製するRD-PKSの発現、効率的な精製法についても引き続き検討中である。
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