研究課題
本研究では、とくに、三つの生命ドメインの変遷に伴うRNA修飾酵素のRNA認識機構や触媒メカニズムの分子進化を、生化学・分子生物学・構造生物学・バイオインフォーマティックス的手法を駆使して、多角的に検討することを目的にしました。個々のRNA修飾酵素の構造・機能解析を展開しつつ、それらを組み合わせた解析や遣伝子破壊株の解析等を合わせ、より多角的にRNA修飾の意義や修飾酵素の分子進化を探ることが主眼でありました。平成19年度は、以下の成果を得ました。(1)TrmH-AdoMet-tRNA複合体の調製に成功しましたので、それを用いて、酵素とtRNAの接触部位を同定し、C末端のアミノ酸残基がtRNA認識に深く関与していることを明らかにしました。また、結晶構造解析に着手したほか、バイオインフォマティックス的手法により、C末のtRNA認識部位の構造予測をおこない、Type I酵素とType II酵素の差異を考察しました。(2)Trm8-Trm82複合体の調製に成功し、その詳細について報告しました。また、Trm82のN末およびC末の両方が、Trm8と接触していることを明らかにし、報告しました。(3)Aquifex aeolicus TrmBのC末構造が、タンパク質の耐熱性に寄与し、メチル化部位選択の正確さに寄与していることを報告しました。(4)高度好熱菌のRNA修飾酵素の遺伝子破壊株を作成し、その表現型を検討するとともに、tRNAの高純度精製法の開発に着手しました。その一部は、報告しましたが、大半は未発表であり、平成20年度以降の計画に引き継ぐ予定であります。
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http://www.ehime-u.ac.jp/~achem/bchem/