研究課題
近年、DNA,RNA,タンパク質などの生体高分子の新たな機能を自然界から取り出してくるだけでなく、試験管内でOから作り出すあるいは自然に存在する分子を元に選りすぐれた分子に"進化"させる「進化分子工学」がめざましく発展しつつあり、抗体工学、タンパク質工学、INA工学など様々な分野で応用されつつある。我々は無細胞の反応系のみで構築された、進化分子工学のためのシステム(ビーズディスプレイ)を開発し、新規タンパク質の創製に応用することを目的としている。本年度は以下の様な成果を上げている。1) ビーズディスプレイ法にグルタルアルデヒドを用いて共有結合を導入することにより、高温でも安定なディスプレイ技術を確立した。この手法は生物を用いたディスプレイでは達成されなかった方法であり、蛋白質の耐熱性向上などを目的とした大規模スクリーニングを可能にする。2)糖鎖結合蛋白質の大腸菌無細胞系での発現系最適化し、活性体として発現させることに成功した。3)2)の蛋白質をビーズ上に提示させ、蛍光基質を用いたアッセイ系を確立した。4)ペプチドライブラリーをビーズ上に提示し、キナーゼ基質をハイスループットに検出する手法を確立した。以上の成果より、DNAおよび蛋白質のマイクロビーズ上へのディスプレイシステムをより高度化し、様々な実験系への応用を可能にしつつある。
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