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これまでに、植物の雌性配偶体細胞(トレニアの裸出胚嚢)へのモルフォリノアンチセンスオリゴのレーザーインジェクションにより、LURE遺伝子が胚嚢へのガイダンスを司る真の花粉管ガイダンス分子であることを示すとともに、胚珠1つ(LUREを発現する助細胞2つ)から安定してリアルタイムPCRを行う方法を開発した。本年度は、こうした系を用いて、LURE以外の重複遺伝子群の機能解析に対するレーザーインジェクションの有効性と、より安価で短時間で入手できるS化DNAオリゴの有効性について検証した。トレニア助細胞のEST解析から、システインに富むペプチドの他に、ペクチンメチルエステラーゼインヒビター(PMEI)に類似の遺伝子群などが主に発現していることを見出した。そこで、PMEIに対する複数のモルフォリノアンチセンスオリゴを作製し、インジェクションを行った。その結果、これらの遺伝子群においても、mRNA量の減少が確認され、ナンセンスメディエイテッドmRNA崩壊が起きている可能性などが考えられた。LUREとは異なり、花粉管誘引には影響が見られず、助細胞の他の機能に対する関与が考えられた。花粉管の侵入や放出に関わることも考えられるので、現在、その解析のための培養系の改変を含め、解析を進めている。また、PMEIに対するS化DNAオリゴをインジェクションした場合には、モルフォリノアンチセンスオリゴほどの標的特異的で強いノックダウンは見られず、モルフォリノアンチセンスオリゴの有効性が示された。こうした知見は、レーザーインジェクションにより真核生物の遺伝子発現制御を行うための、重要な知見であると評価できる。
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