| 研究概要 |
植物では,生殖過程でのダイナミックなDNAメチル化/脱メチル化の変化が重要であることは,ゲノムインプリンティングなど限られた例が明らかになっているのみで,その全容はよく分かっていない。さらに,雑種強勢,雑種弱勢や異質倍数体化にDNAメチル化などのエピジェネティックな情報の変化が関わることが明らかになりつつあり,植物進化との関連が議論されている。このような状況の中,生殖系列や胚発生過程でのゲノムワイドなDNAメチル化の変化を解析し,エピジェネティックな制御を受ける遺伝子を多数同定することは必要不可欠であると考えられる。
本研究課題では,LMDの技術により胚,胚乳などの生殖系列の組織をイネより単離し,全ゲノムタイリングアレイを利用して,メチル化DNAのパターンの異なる領域をゲノムワイドに調査するというものである。そこで本年度は,イネのイネ品種「日本晴」「キタアケ」を材料に用い,受精後経時的に単離した未熟種子をFarmer's fixative[ethanol:acetate(3:1)]で固定して,パラフィン包埋切片を作製した。LMD装置を用いて,未熟な胚,胚乳を単離し,全DNAを抽出した。胚と胚乳より抽出したDNAを用いて,bisulfite処理(非メチル化シトシンはウラシルに変換されるが,メチル化シトシンは変換されないため,メチル化シトシンと非メチル化シトシンを区別することができる)を行い,イネのインプリント遺伝子領域において,胚と胚乳間で塩基配列に違いがあるかどうかを調査したが,単離したDNAが少なかったためかPCRによってうまく増幅しなかった。現在,微量なLMDサンプルではなく,葉の組織より単離したDNAを用いて,bisulfite処理の条件検討を行っている。平成20年度は,まずbisulfite処理の条件を確立させ,再度LMDを用いて未熟な胚,胚乳を単離後,タイリングアレイによるメチル化領域の解析を行う。
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