蛍光偏光解消法によるユビキチン関連因子等の未知ターゲット探索

2009 年度 自己評価報告書

• 研究課題/領域番号: 19380056
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用微生物学
• 研究機関: 青山学院大学 (2010); 独立行政法人海洋研究開発機構 (2007-2009)
• 研究代表者: 阿部 文快 独立行政法人海洋研究開発機構, 海洋・極限環境生物圏領域, チームリーダー (30360746)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2010
• キーワード: 蛍光偏光解消法 / 時間分解測定 / 細胞膜物性 / 蛍光寿命 / 出芽酵母 / ユビキチン機構 / 回転ブラウン運動 / 分子間相互作用

研究概要

酵母細胞を高圧培養すると、Trp輸送体Tat1とTat2の分解が促進されTrp飢餓に陥る。輸送体分解を担うのはRsp5ユビキチンリガーゼだが、圧力刺激を受け、いかにしてそれらをユビキチン化するのか?ターゲットの認識機構は謎である。本研究では、偏光解消法と時間相関単一光子計数法を用いてターゲットを同定する。すなわち蛍光標識Rsp5分子の回転運動から既知のターゲットの解離会合を定量解析するとともに、未知因子の探索を行う。特にRsp5は多様な膜タンパク質のユビキチン化を担っているため、膜構造そのものを調べる必要がある。そこで、蛍光異方性プローブTMA-DPHを用い膜物性を計測する。すなわち、分子間相互作用の解析に先立って、時間分解蛍光偏光解消法の計測技術の開発を第一のゴールとした。

研究成果

• [雑誌論文] Fluconazole modulates membrane rigidity, heterogeneity and water penetration into the plasma membrane in Saccharomyces cerevisiae (2010)
  • 著者名/発表者名: Abe, F., Usui, K., Hiraki, T.
  • 雑誌名: Biochemistry 48 ページ: 8494-8504
  • 査読あり
• [雑誌論文] Overexpression of SNA3 stabilizes tryptophan permease Tat2, potentially competing for the WW domain of Rsp5 ubiquitin ligase with its binding protein (2010)
  • 著者名/発表者名: Hiraki, T., Abe, F.
  • 雑誌名: Bull.FEBS Lett. 584 ページ: 55-60
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sorting defects of the tryptophan permease Tat2 in an erg2 yeast mutant (2009)
  • 著者名/発表者名: Daicho, K., Makino, N. Hiraki, T., Ueno, M., Uritani, M., Abe, F., Ushimaru, T.
  • 雑誌名: FEMS Microbiol.Lett. 298 ページ: 218-227
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mechanistic role of ergosterol in membrane rigidity and cycloheximide resistance in Saccharomyces cerevisiae (2009)
  • 著者名/発表者名: Abe, F., Hiraki, T.
  • 雑誌名: Biochim.Biophys.Acta 1788 ページ: 743-752
  • 査読あり
• [雑誌論文] Global screening of genes essential for growth in high-pressure and cold environments : searching for basic adaptive strategies using a yeast deletion library (2008)
  • 著者名/発表者名: Abe, F., Minegishi, H.
  • 雑誌名: Genetics 178 ページ: 851-872
  • 査読あり
• [学会発表] 圧力とゲノムの摂動で測る細胞内のすき間 (2009)
  • 著者名/発表者名: 阿部文快
  • 学会等名: 日本生化学会
  • 発表場所: ポートピアホテル、神戸
  • 年月日: 2009-10-21
• [学会発表] 高圧蛍光偏光解消法の開発と微生物細胞膜への圧力効果 (2009)
  • 著者名/発表者名: 阿部文快
  • 学会等名: 第16回生物関連高圧研究会シンポジウム
  • 発表場所: 産業技術総合研究所 臨海副都心センター、東京
  • 年月日: 2009-07-30
• [学会発表] フルコナゾールによる細胞膜の動的構造変化と erg3 株の耐性 (2009)
  • 著者名/発表者名: 阿部文快
  • 学会等名: 酵母遺伝学フォーラム
  • 発表場所: ノバホール、つくば
  • 年月日: 2009-07-29
• [学会発表] 圧力を用いて細胞内のすき間を測る (2008)
  • 著者名/発表者名: 阿部文快
  • 学会等名: 日本分子生物学会
  • 発表場所: ポートピアホテル、神戸
  • 年月日: 2008-12-11
• [学会発表] ナノ秒計測で探る細胞膜の動態と薬剤感受性 (2008)
  • 著者名/発表者名: 阿部文快
  • 学会等名: 酵母遺伝学フォーラム
  • 発表場所: 北海道大学、札幌
  • 年月日: 2008-09-11
• [学会発表] 圧力生理学の挑戦 ～細胞機能の新たな理解をめざして (2008)
  • 著者名/発表者名: 阿部文快
  • 学会等名: 酵母合同シンポジウム
  • 発表場所: 甲南大学、神戸
  • 年月日: 2008-06-05
• [産業財産権] 抗菌剤に対する微生物のMICを予測する方法 (2008)
  • 発明者名: 阿部文快
  • 権利者名: 独立行政法人海洋研究開発機構
  • 産業財産権番号: 特許,特願2008-231666
  • 出願年月日: 2008-09-10