リン酸基結合タグ分子を利用したリン酸化プロテオーム解析技術の開発

2009 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19390011
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 小池 透 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (90186586)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2009
• キーワード: リン酸化プロテオミクス / ケミカルバイオロジー / リン酸化蛋白質 / キナーゼ / フォスファターゼ

研究概要

フォスタグ技術を世界標準のリン酸化プロテオーム解析技術にすることを目的として,(1)蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を利用したリン酸化ペプチドのフォスファターゼ反応の解析システム,(2)リン酸化タンパク質のフォスタグ電気泳動システム,(3)リン酸化生体分子の分離カラムシステムなどを開発した.本研究で開発した新しいリン酸化合物解析法は,今後のリン酸化プロテオーム研究を劇的に促進するものであると確信している.

研究成果

• [雑誌論文] Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysates (2009)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, T. Koike
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 389 ページ: 83-85
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phospho-peptides (2009)
  • 著者名/発表者名: K. Takiyama, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Fujioka, Y. Kubo, T. Koike
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 388 ページ: 235-241
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, T. Koike
  • 雑誌名: Electrophoresis 30 ページ: 550-559
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE (2009)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike
  • 雑誌名: Nature Protocols 4 ページ: 1513-1521
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, T. Koike
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 378 ページ: 102-104
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, T. Koike
  • 雑誌名: Proteomics 8 ページ: 2994-3003
  • 査読あり
• [雑誌論文] FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway (2008)
  • 著者名/発表者名: M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J, Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S.J. Elledge, M. Takata
  • 雑誌名: Nature Structural & Molecular Biology 15 ページ: 1138-1146
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity polyacrylamide gel (2007)
  • 著者名/発表者名: S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, Y. Shiro
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 360 ページ: 160-162
  • 査読あり
• [雑誌論文] A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis Analytical (2007)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike
  • 雑誌名: Biochemistry 361 ページ: 294-298
  • 査読あり
• [雑誌論文] Label-free kinase profiling using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (2007)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, T. Koike
  • 雑誌名: Molecular & Cellular Proteomics 6 ページ: 356-366
  • 査読あり
• [学会発表] リン酸基親和性電気泳動法を用いたヒスチジン・アスパラギン酸リン酸化タンパク質の定量解析法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 柳原志穂, 木下恵美子, 木下英司, 中神明, 小池透
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-10-21
• [学会発表] 蛋白質リン酸化解析のためのリン酸基親和性2次元電気泳動法 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 第60回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 長野
  • 年月日: 2009-09-18
• [学会発表] Phos-tag固定化ポリマーを利用したシグナル伝達解析における選択的蛋白質リン酸化検出のための新技術 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第7回大会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2009-07-27
• [学会発表] フォスタグ結合型新規リン酸基アフィニティービーズを利用した細胞抽出液からのリン酸化蛋白質の分離と精製 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 井上知香, 小池透
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第6回大会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2008-07-29
• [学会発表] ウエスタンブロッティング膜に転写されたリン酸化蛋白質の検出とダイレクト膜上質量分析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 中西豪, 安藤英治, 古田大, 綱澤進, 西村紀, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第128年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2008-03-26
• [学会発表] Phosphate affinity 2-D gel electro- phoresis for the analysis of phospho- proteins (2007)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita- Kikuta, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, Mamoru Matsubara, T. Koike
  • 学会等名: 第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会合同大会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2007-12-12
• [学会発表] 遺伝子変異を認識する機能性分子を用いた遺伝子診断技術の開発 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 由元実希, 小池透
  • 学会等名: 第58回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 宇部
  • 年月日: 2007-11-07
• [学会発表] リン酸化プロテオーム研究の新戦略 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第5回大会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2007-07-30
• [学会発表] リン酸基結合ナノ分子を利用した新しい二次元電気泳動法の開発 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 大家志織, 松原守, 小池透
  • 学会等名: 第49回生化学会中四国支部例会
  • 発表場所: 高知
  • 年月日: 2007-05-19
• [学会発表] 消化プロセスで生じる創傷治癒ホルモン・リゾホスファチジン酸による消化管組織修復 (2007)
  • 著者名/発表者名: 中保, 堀内剛, 平野薫, 徳村彰, 盛重純一, 小池透, Mandi Murph, Gordon Mills
  • 学会等名: 里内清, 第49回生化学会中四国支部例会
  • 発表場所: 高知
  • 年月日: 2007-05-19
• [図書] 細胞内リン酸化タンパク質を高精度に検出するためのPhos-tagビーズによるサンプル前処理法,細胞工学 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 総ページ数: 938
  • 出版者: 秀潤社
• [図書] Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study (2009)
  • 著者名/発表者名: E.Kinoshita, E.Kinoshita-Kikuta, T.Koike
  • 総ページ数: 104
  • 出版者: Current Proteomics
• [図書] リン酸基アフィニティー電気泳動法を利用した遺伝子診断法,実験医学 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 総ページ数: 3033
  • 出版者: 羊土社
• [図書] 金属イオンの特性を利用したリン酸化タンパク質の特異的認識と検出 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 総ページ数: 1897
  • 出版者: 薬学雑誌
• [図書] リン酸基親和性クロマトグラフィーを用いた細胞内のリン酸化タンパク質の網羅的精製,バイオテクノロジージャーナル (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司,木下恵美子,小池透
  • 総ページ数: 217
  • 出版者: 羊土社
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/