| 研究概要 |
・我々はこれまでの研究で骨髄間葉系細胞にNotch Intracellular Domain(NICD)を導入し、サイトカイン(bFGF, CNTF, Forskolin)刺激をすると神経細胞に分化すること、また誘導を逆にしサイトカイン(PDGF, Heregulin, bFGF, Forskolin)で刺激しNICDを導入すると骨格筋が誘導されることを見い出した。骨髄間葉系細胞におけるNotchの作用を検証した。
・骨髄間質細胞にNICDを導入すると、神経前駆細胞へ分化する。この現象に関わる分子を明らかにするために、NICD導入後、様々な各種阻害剤を加えて、分化への影響を検討した。その結果、NICDはMEK1/2シグナル系を主体として作用をしている可能性が示唆された。
・NICDの様々なdeletion mutantを作成し、トランスフェクションすることによって、神経細胞への分化転換に必要最小限のNotch細胞内領域を検索しところ、アンキリン・リピート領域に強い誘導活性があることが示唆された。これは、NICDによってもたらされる神経細胞誘導が、従来言われている核における転写制御作用によるものではないことを示唆しており、大きな所見である。また、アンキリン・リピートとGFPとの融合蛋白質の発現ベクターも作成したが、これをトランスフェクションしてもやはり同様の高効率で神経細胞へと分化させうることが確認できた。したがって、今後はこの融合蛋白質を骨髄間質細胞へと導入し、抗GFP抗体で免疫沈降を行うことによって、アンキリン・リピートと相互作用する蛋白質を同定することを計画した。
・NICD-GFP融合蛋白質を骨髄間質細胞へと導入し、抗GFP抗体で免疫沈降を行うことによって、NCIDへの結合蛋白の同定を試みた。
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