| 研究課題/領域番号 |
19390285
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
原 寿郎 九州大学, 医学研究院, 教授 (40150445)
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| 研究分担者 |
楠原 浩一 九州大学, 医学研究院, 准教授 (20243941)
高田 英俊 九州大学, 大学病院, 特任准教授 (70294931)
井原 健二 九州大学, 大学病院, 講師 (80294932)
中津 可道 九州大学, 医学研究院, 准教授 (00207820)
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| キーワード | 遺伝子治療 / ベクター / ヒト化マウス |
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| 研究概要 |
伴性劣性無ガンマグロブリン血症(XLA)は、X染色体に存在するBruton Tyrosin Kinase(BTK)遺伝子の変異により、B細胞系の分化障害を来たす原発性免疫不全症候群である。対症療法としてガンマグロブリン補充療法が行われているが、生涯にわたる補充は膨大な治療費を費やし、患者自身の生活の質の低下をもたらしている。これまで様々な原発性免疫不全症候群に対して遺伝子治療が試みられたが、成功例はごくわずかであり、導入遺伝子による発がんが大きな問題となった。そこで従来の遺伝子導入による治療法に代わって、変異遺伝子を修復する次世代の治療法の開発が望まれている。また、マウスを用いた移植実験により、XLAには造血幹細胞(HSC)の一部で変異遺伝子を修復でき、かつそれが増殖優位性を獲得できれば、B細胞の分化障害を回復できる可能性が示されている。
アデノAAVハイブリッドベクター(HD-Ad.AAV.ベクター)は、HSCに感染性を示すAd5/35キメラベクターと、相同組換えによる目的遺伝子座領域での組込み(ターゲティング)による修復をおこすAAVベクターの両者の長所を備えている。我々はBTK遺伝子のクローニングを行い、GFPとHyg耐性遺伝子をマーカーとしたHD-Ad.AAV.BTKベクターを作製した。本ベクターを血球系細胞株K562に感染させたところ、MOI500で25.8±2.1%、MOI1000で40.7±3.0%のGFP陽性細胞を認め、それぞれの0.5±0.3%、1.3±0.6%でHyg耐性株が得られた。現在Hyg耐性株におけるBTK遺伝子座へのターゲティング効率を検討している。
また、理化学研究所の石川らと共同研究で、XLA患者HSCをNOD/SCID/γc完全欠失マウスに移植してモデルマウスを作製した。このモデルマウスはヒトXLA患者と同様にB細胞が欠失しており、無ガンマグロブリン血症を呈していた。IHD-Ad.AAV.BTKベクターは、正常ヒトさとい臍帯血CD34陽性細胞で10%程度のGFP陽性細胞が得られており、今後は感染細胞をモデルマウスに移植してB細胞系の発現の解析を検討する。
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