自然免疫の新たな制御因子Ubc13による表皮の分化・自然免疫制御機構の研究

2007 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19390297
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 佐山 浩二 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (80187286)
• 研究分担者: 平川 聡史 愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (50419511) ; 花川 靖 愛媛大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (90284398)
• キーワード: ユビキチン / Ubc13 / TAK1 / NF-kB / ノックアウトマウス / cre-recombinase / 角化細胞 / 皮膚

研究概要

Ubc13遺伝子をloxP配列ではさみこんだUbc13^<flox/flox>マウスとK5プロモーターで発現するK5-Creマウスを交配することにより、K5-Cre/Ubc13<flox/+>マウスを得た。このマウスを再度Ubc13^<flox/flox>マウスと交配することによりK5-Cre/Ubc13^<flox/flox>マウスを作成した。このマウスでは、K5が発現している組織にcre-recombinaseが発現しているため、loxP配列ではさまれたUbc13がこの酵素により切断され、表皮角化細胞特異的Ubc13KOマウスとなる。Geno-typingはマウスの尾を切断し、genomic DNAを精製し、これをテンプレートとして、各々特異的プライマーを用いたPCR法を行うことにより確認した。
上述のK5-Cre/Ubc13^<flox/flox>マウスは胎児期にK5を発現する時期からUbc13がノックアウトされており、発生時期からUbc13ノックアウトの影響を受ける。そこで次に、発生時期の影響を受けないように、成体の表皮特異的にUbc13をノックアウトする。K14プロモーターで発現するCre-EslrogenReceptor(ER)の融合タンパクを用い、リガンドであるTamoxifenが投与された時のみに、Cre-ERの融合タンパクが核内に移行し、Ubc13をノックアウトするシステムである。K14-Cre-ERマウスをPierre CHAMBON教授(フランス)より恵与を受け、Ubc13^<flox/flox>のマウスとの交配により、上述のK5-Cre/Ubc13^<flox/flox>マウスと同様に、K14-Cre-ER/Ubc13^<flox/flox>マウスを作成した。

研究成果

• [雑誌論文] STAT5a/PPARgamma pathway regulates involucrin expression in keratinocyte differentiation (2007)
  • 著者名/発表者名: Dai X, Sayama K, Shirakata Y, Hanakawa Y, Yamasaki K, Tokumaru S, Yang L, Wang X, Hirakawa S, Tohyama M, Yamauchi T, Takashi K, Kagechika H, Hashimoto K.
  • 雑誌名: J Invest Dermatol 127 ページ: 1728-35
  • 査読あり
• [雑誌論文] CXCL16 is a novel mediator of the innate immunity of epidermal keratinocytes (2007)
  • 著者名/発表者名: Tohyama M, Sayama K, Komatsuzawa H, Hanakawa Y, Shirakata Y, Dai X, Yang L, Tokumaru S, Nagai H, Hirakawa S, Sugai M, Hashimoto K
  • 雑誌名: Int Immunol 19 ページ: 1095-102
  • 査読あり
• [学会発表] Ablation of TAK1 in mouse keratinocytes disturbed hair follicle development (2007)
  • 著者名/発表者名: Sayama, K.Kajiya, K.Shirakata, Y.Hanakawa, Y.Hirakawa, S.Dai, X.Nagai, H.Akira, S.Kishimoto, J.and Hashimoto, K.
  • 学会等名: 68^h Annual Meeting of the Society for Investigative Dermatology
  • 発表場所: Los Angeles
  • 年月日: 20070509-12