| 研究課題/領域番号 |
19500402
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
三好 浩稔 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 講師 (70292547)
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| 研究分担者 |
大根田 修 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (30311872)
大川 敬子 筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 講師 (30251052)
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| キーワード | 造血幹細胞 / ストローマ細胞 / 胎仔肝臓細胞 / 固定 / 凍結保存 / 分化・増殖 / 三次元培養 / ティッシュ・エンジニアリング |
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| 研究概要 |
本研究では、生体外において造血系細胞を効率的に増幅できる培養系を確立することを目的として、固定処理や凍結保存処理を施したストローマ細胞と造血系細胞との三次元培養実験を行った。この際、ストローマ細胞の処理方法が各種造血系細胞の増幅効率に及ぼす影響について検討した。
実験では、ストローマ細胞であるDAS 104-8細胞株を三次元培養担体(polyvinyl formal樹脂多孔質体)に播種して1週間培養したのち、担体上の細胞に固定処理や三次元凍結保存処理を施した。これらの担体を解凍、あるいは洗浄し、マウス胎仔肝臓細胞を担体に播種して2週間培養することによって、胎仔肝臓細胞中の造血系細胞を増幅した。
まず固定処理に関して、固定後の三次元培養担体の洗浄条件を決定したのち、ホルムアルデヒド架橋処理したストローマ細胞を用いて胎仔肝臓細胞中の造血系細胞の増幅を試みた。その結果、培養前後での造血前駆細胞(c-kit陽性細胞)の増幅率は0.1倍、造血前駆・幹細胞(CD34陽性細胞)は0.3倍と全く増幅されず、むしろ細胞数は減少した。それに対して、グルタールアルデヒド架橋処理したストローマ細胞を用いた場合にはそれぞれ5倍と2.5倍に増幅され、これらの値は三次元凍結保存処理を施した場合とほぼ同等であった。
以上の結果から、固定にはグルタールアルデヒド処理が適していることが明らかになった。さらに、固定処理したストローマ細胞は死滅しているにもかかわらず未分化な造血系細胞を増幅できたことから、簡便かつ安全な造血幹細胞の増幅方法を確立できる可能性が示された。
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