細胞増殖に関わるO_2^-生成型NADPH oxidase の分子基盤と活性化機構

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19510219
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物分子科学
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 田村 実 愛媛大学, 理工学研究科, 准教授 (00128349)
• 連携研究者: 住本 英樹 九州大学, 医学研究科, 教授 (30179303)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 酵素 / 生体生命情報学 / 発生分化 / シグナル伝達 / 活性酸素

研究概要

ヒト大腸癌細胞Caco-2のO_2^-生成酵素Nox1を無細胞系で活性化することに成功した。培養したCaco-2から形質膜を分離し,遺伝子工学により創成した、2つの活性化因子の融合タンパク質p51N-Racと混ぜ、FADとNADPHを加えるとO_2^-が発生した。p51NとRacの相互作用を損なわせた変異体は活性化を起さなかった。細胞を予めTNFαで刺激しておくとO_2^-生成活性は上昇した。一方血管平滑筋細胞A10についても形質膜を分画し、上述のやり方でNox1のO_2^-生成活性を見ることに成功した。ここではp47を加えるとさらに活性化が見られた。A10を予めアンジオテンシンIIで刺激しておくと活性は40%ほど上昇した。

研究成果

• [雑誌論文] Activation of NADPH oxidase1 in tumor colon epithelial cell (2008)
  • 著者名/発表者名: Yukio Nisimoto, Ryoko Tsubouchi, Diebold Becky A. Shanlou Qiao, Hisamitsu Ogawa, Takuya Ohara, and Minoru Tamura
  • 雑誌名: Biochem. J. 415 ページ: 57-65
  • 査読あり
• [雑誌論文] 外に出たO_2^-はどのようにして細胞内シグナルとなるのか? (2008)
  • 著者名/発表者名: 田村実
  • 雑誌名: 蛋白質・核酸・酵素53 1797
• [雑誌論文] p40^<phox>as an alternative organizer to p47^<phox>in Nox2 activation (2007)
  • 著者名/発表者名: Minoru Tamura, Iichiro Shiozaki, Shohei Ono, Kei Miyano, Sachio Kunihiro, Takayuki Sasaki
  • 雑誌名: FEBS Lettes 581 ページ: 4533-4538
  • 査読あり
• [学会発表] 大腸菌を用いたヒトbeta-アクチンの調製法 (2008)
  • 著者名/発表者名: 田村実、伊藤克法、國廣幸雄、秋田宏、原垣内美保子
  • 学会等名: BMB 2008
  • 発表場所: 神戸ポートアイラン
  • 年月日: 2008-12-12
• [学会発表] p47^<phox>の代替因子としてのp40^<phox>の再発見-食細胞NADPH oxidase活性化において- (2007)
  • 著者名/発表者名: 塩崎猪一郎、佐々木孝幸、水木一洋、國廣幸雄、宮野佳、田村実
  • 学会等名: BMB 2007
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2007-12-13
• [学会発表] NADPH oxidase1(Nox1)の無細胞活性化系の確立 (2007)
  • 著者名/発表者名: 吉成光市, 宮本和浩、坪内涼子、西本行男、田村実
  • 学会等名: BMB 2007
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2007-12-13
• [学会発表] NADPH oxidase成分タンパク質gp91^<phox>およびRacの無細胞タンパク質合成の試み (2007)
  • 著者名/発表者名: 水木一洋, 木綱崇之、菅裕未佳、堀弘幸、田村実
  • 学会等名: BMB 2007
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2007-12-13
• [学会発表] ヒト大腸NADPH oxidase1(Nox1)の活性活性化機構 (2007)
  • 著者名/発表者名: 楠野太郎、吉成光市, 水木一洋、坪内涼子、西本行男、田村実
  • 学会等名: 日本生化学会中国・四国支部会
  • 発表場所: 高知市文化プラザ
  • 年月日: 2007-05-20
• [学会発表] p40^<phox> : p47^<phox>のalternative factorとしての再発見ー食細胞NADPH oxidase活性化において (2007)
  • 著者名/発表者名: 塩崎猪一郎, 佐々木孝幸、小野征平、國廣幸雄、田村実
  • 学会等名: 日本生化学会中国・四国支部会
  • 発表場所: 高知市文化プラザ
  • 年月日: 2007-05-20
• [備考]
  • URL: http://www.adm.ehime-u.ac.jp/?achem/