組換え昆虫細胞によるウイルス様粒子の連続生産システムの構築

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19560777
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 山地 秀樹 神戸大学, 大学院工学研究科, 准教授 (40283874)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 昆虫細胞 / 組換えタンパク質生産 / ウイルスタンパク質 / ワクチン / ウイルス様粒子 / 日本脳炎ウイルス

研究概要

ウイルスの表面タンパク質の遺伝子を発現する組換え昆虫細胞を作製し, 安全かつ有効なワクチンとして利用可能なウイルス様粒子の生産について検討した. カイコガ由来のアクチンプロモーターの上流にバキュロウイルス由来のトランス作用因子とエンハンサーを配し, 選択マーカーを有する発現ベクターに, 日本脳炎ウイルスの表面タンパク質prMおよびEの遺伝子を挿入した. このプラスミドを培養昆虫細胞に導入して薬剤存在下で培養することにより, 哺乳動物細胞と比べて100倍以上のEタンパク質を分泌生産する細胞を得ることに成功した.

研究成果

• [雑誌論文] A high-level expression vector containing selectable marker for continuous production of recombinant protein in insect cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Takuya Shishido, Naoya Kurata, Myung Eui Yoon, Tsutomu Tanaka, Hideki Yamaji, Hideki Fukuda, Akihiko Kondo
  • 雑誌名: Biotechnol. Lett. 31 ページ: 623-627
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of functional antibody Fab fragment by recombinant insect cells (2008)
  • 著者名/発表者名: Hideki Yamaji, Toshitaka Manabe, Keizo Watakabe, Masaru Muraoka, Ikuo Fujii, Hideki Fukuda
  • 雑誌名: Biochem. Eng. J. 41 ページ: 203-209
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of bionanocapsules in immobilized insect cell culture using porous biomass support particles (2007)
  • 著者名/発表者名: Takuya Shishido, Masaru Muraoka, Hideki Yamaji, Akihiko Kondo, Hideki Fukuda
  • 雑誌名: J. Biosci. Bioeng. 103 ページ: 572-574
  • 査読あり
• [学会発表] 昆虫細胞を用いた日本脳炎ウイルスタンパク質の生産 (2009)
  • 著者名/発表者名: 高橋裕輔, 中村匡崇, 勝田知尚, 山地秀樹
  • 学会等名: 化学工学会第74年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2009-03-19
• [学会発表] Low multiplicity infection of 293 cells for adenovirus vector production (2008)
  • 著者名/発表者名: Naoya Morishita, Kentaro Yamada, Shuji Kubo, Akinobu Gotoh, Tomohisa Katsuda, Hideki Fukuda, Hideki Yamaji
  • 学会等名: JAACT 2008 Fukuoka (The 21th Annual and International Meeting of the Japanese Association for Animal Cell Technology), "POWER OF CELLS, Animal Cell Technology in Bioscience, Bioengineering and Bioindustries"
  • 発表場所: Fukuoka
  • 年月日: 2008-11-26
• [学会発表] Production of adenovirus vector by 293 cells immobilized within porous biomass support particles (2008)
  • 著者名/発表者名: Naoya Morishita, Shuji Kubo, Akinobu Gotoh, Tomohisa Katsuda, Hideki Fukuda, Hideki Yamaji
  • 学会等名: JAACT 2008 Fukuoka (The 21th Annual and International Meeting of the Japanese Association for Animal Cell Technology), "POWER OF CELLS Animal, Cell Technology in Bioscience, Bioengineering and Bioindustries"
  • 発表場所: Fukuoka
  • 年月日: 2008-11-26
• [学会発表] Secretory production of Japanese encephalitis virus E protein by recombinant insect cells (2008)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Takahashi, Masataka Nakamura, Takanori Furuta, Tomohisa Katsuda, Hideki Yamaji
  • 学会等名: "Bioseparation for Biorecognition and Bionanotechnology" Conference
  • 発表場所: Hanyang University, Korea
  • 年月日: 2008-10-27
• [学会発表] 293細胞の固定化培養によるアデノウイルスベクターの生産 (2008)
  • 著者名/発表者名: 森下直矢, 山田健太郎, 山地秀樹, 福田秀樹
  • 学会等名: 化学工学会第73年会
  • 発表場所: 浜松
  • 年月日: 2008-03-18
• [学会発表] Display of functional antibody Fab fragment on the baculovirus surface (2007)
  • 著者名/発表者名: Hideki Yamaji, Hideki Fukuda
  • 学会等名: 13th European Congress on Biotechnology
  • 発表場所: Barcelona, Spain
  • 年月日: 2007-09-18
• [学会発表] 昆虫細胞を用いる機能性抗体の生産システム (2007)
  • 著者名/発表者名: 古田貴憲, 山地秀樹, 福田秀樹
  • 学会等名: 化学工学会第39回秋季大会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2007-09-14