| 研究概要 |
サルモネラはストレス特異的シグマ因子RpoSを高発現させると増殖が阻害される。その原因を解析する過程で,RpoSによって発現が誘導される新規トキシン遺伝子rsaBを発見し,さらにその上流の遺伝子rsaAはそれに対するアンチトキシンをコードしていることを明らかにした。このことから,rsaA-rsaB遺伝子セットは1組のアディクションモデュールを形成していると考えられる。このモデュールは既知のアディクションモデュールとは相同性を示さず,サルモネラに特異的に存在する。本研究は,このモデュールの発現制御機構と生理機能を解明することを目的として計画されたものである。本年度の研究によって得られた成果は以下の通りである。
1.RpoS高発現時のRsaBによる増殖阻害効果は高温時に特異的に見られることが明らかになった。しかし,RsaB自身を高発現した場合には,低温でも増殖阻害効果が見られた。したがって,増殖阻害効果の温度依存性はRsaBの発現または機能発現が温度依存性であることに起因しているものと考えられる。
2.ノーザンプロッティングによる転写解析の結果,予想通りrsaB遺伝子はRpoS依存的に転写されていることが示されたが,これに対して,rsaA遺伝子の転写は本実験条件の範囲内では検出されないことが明らかになった。
3.RsaAおよびRsaB蛋白質の欠失解析の結果,RsaAのアンチトキシン活性とRsaBのトキシン活性はともに,それぞれの蛋白質のC末側領域に局在することが明らかになった。
4.RsaBトキシンの標的分子の同定を目指して,精製RsaB蛋白質を用いたプルダウン解析を行ったところ,翻訳制御蛋白質であるCsrAが共精製されてくることが明らかになった。サルモネラではcsrAが必須遺伝子であることと合わせて考えると,RsaBはCsrAに結合してその機能を阻害することによりトキシン活性を発揮するものと推定される。
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