| 研究概要 |
細胞内シグナルネットワークにおけるミリスチル化蛋白質の機能調節機構を理解するために、NAP-22について、ミリスチル化依存的に結合する蛋白質の同定を行った。大腸菌で発現させたミリスチル化されているNAP-22とミリスチル化されていないNAP-22を精製し、ミリスチル化されている時に結合する蛋白質を質量分析で解析した。その結果、NAP-22ではカルモジュリン以外にPKCαやERK1,2などのプロテインキナーゼが同定された。ERK1とNAP22が直接結合し、更にERK1は、NAP-22を直接リン酸化することが分かった。現在、その生理的な意味を、細胞を用いた系で検討している。
一方、ミリスチル化蛋白質が関与するシグナル伝達系の理解のためには、細胞内でのこれらの蛋白質のリン酸化解析も必要である。リン酸化解析を効率よく行うシステムとして、リン酸化蛋白質やぺプチドを濃縮し、その後質量分析で解析する方法の最適化を行った。リン酸化濃縮分離ゲルであるPhos-tagアクリルアミドゲルを用いることにより、個々のリン酸化部位に対応したバンドを分離し、それに対応するリン酸化部位を同定することに成功した。更に、Native Pageと組み合わせた2次元電気泳動を行うことにより、網羅的にリン酸化状態を分離することができた。今後、このシステムを利用することにより、ミリスチル化蛋白質をはじめ相互作用する蛋白質のリン酸化状態を解析する予定である。
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