MCMヘリカーゼ複合体による染色体複製制御の酵素学的解析

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19570145
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 機能生物化学
• 研究機関: (財)東京都医学研究機構
• 研究代表者: 高井 裕子 (ZHIYING You) 財団法人東京都医学研究機構, 東京都臨床医学総合研究所, 主任研究員 (90332270)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 酵素の作用機作と調節

研究概要

MCM複合体は複製フォークにおけるDNAヘリカーゼとして機能する。昨年度に、MCMのヘリカーゼ活性はCdt1と結合して複合体を形成しより強いヘリカーゼ活性を示すこと、さらにCdt1はATPに結合する可能性を見出した。本年度は、Cdt1配列上にATP結合タンパクとの相同配列を見出し、その保存配列の変異体を作製した。この変異体はin vitroでATP結合能をほぼ完全に消失していた。さらにこれと同じ変異がdrosophilaの発生異常の原因として同定されていることが明らかとなった。以上の事実はCdt1のATP結合は、その機能制御に重要な役割を果たすことを示す。

研究成果

• [学会発表] EBウィルス oriP上への無細胞系pre-RC構築 (2008)
  • 著者名/発表者名: 森山賢治, 高井裕子, 正井久雄
  • 学会等名: 日本分子生物学会(BMB)2008
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 20081209-12
• [学会発表] クランプローダー複合体とMCMサブ複合体の相互作用解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 谷口莉菜, Zhiying You, 正井久雄, 釣本敏樹
  • 学会等名: 日本分子生物学会(BMB)2008
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 20081209-12
• [学会発表] Interaction of Mcm complexes with Cdt1 protein : Effect of Cdt1 on Mcm helicase activity (2008)
  • 著者名/発表者名: Zhiying You and Hisao Masai
  • 学会等名: 6th 3R (Replication, Recombination, Repair) symposium
  • 発表場所: Tsumagoi, Shizuoka
  • 年月日: 20081027-30
• [学会発表] Cdt1 forms a complex with MCM and activates its helicase activity (2008)
  • 著者名/発表者名: Zhiying You and Hisao Masai
  • 学会等名: EMBO Conference on "Replication & Segregation of Chromosomes"
  • 発表場所: Geilo, Norway
  • 年月日: 20080616-20
• [学会発表] Cdt1はMCMヘリカーゼと複合体を形成し,そのヘリカーゼ活性を促進する (2008)
  • 著者名/発表者名: Zhiying You
  • 学会等名: 第19回DNA複製・分配ワークショプ
  • 発表場所: 静岡県伊豆市・ラフォーレ修善寺
  • 年月日: 20080304-07
• [図書] "MCMタンパク質のDNA複製における役割" 実験医学増刊号「染色体サイクル」25 (2007)
  • 著者名/発表者名: Zhiying You, 正井久雄
  • 総ページ数: 609-613
• [図書] UV クロスリンキング法" 実験医学別册「分子間相互作用解析バンドブック」19 (2007)
  • 著者名/発表者名: Zhiying You, 正井久雄
  • 総ページ数: 164-167