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p97/p37膜融合経路に関して、必須SNARE分子はこれまでGS15しか明らかになっていないが、膜融合が進行するためにはこれ以外のSNARE分子も必要である。そこで、本研究では、p97/p37膜融合経路に必要なSNARE複合体の同定と機能解析を目指す。
p97/p37経路は細胞周期間期におけるゴルジ体と小胞体の維持に必須であるが、本年度はゴルジ体を対象としてSNARE分子の同定を試みた。間期細胞のゴルジ体を1M KCLで処理し塩に感受性を示す結合因子を除去したゴルジ体(swG)を調製した。swG上のにSNARE複合体を維持するために、すでにp97/p37/GS15を含む複合体を解離しないことが明らかなCHAPSを用いて可溶化した。これを、ショ糖密度勾配遠心分離により分画しGS15の分布を調べると、GS15は分子量約15kDaと小さくGS15のみでは複合体を形成することはないと考えられているにも関わらす、その分布は非常に重い分子量の画分に存在していることが明らかとなった。つまり、この条件においてGS15を含む複合体(他の必須SNARE分子を含む)は解離することなく維持されていると考えられ、この条件でゴルジ体を可溶化することにより、SNARE複合体の同定が可能であると考えられた。そして、p97/p37を結合させたswGも同様に分画したところ、p97の分布にp97/p37のみで見られるピークよりも重い画分に新たなピークが確認された。また、この画分には、GS15も存在していることから、p97/p37/SNARE複合体(GS15を含む)が存在していると考えられ、この画分に含まれるSNARE分子を同定することによりp97/p37経路に必須なSNARE複合体を明らかに出来ると考えられる。今後は、この画分を対象に、抗p37抗体による免疫共沈殿を行い共沈される因子の同定を行う。
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