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網膜のマージン領域、神経性網膜と毛様体の中間領域(Ciliary Marginal Zone:CMZ)に存在する幹細胞は機能的な網膜組織の形成終了後も長期間にわたって未分化性を維持し、網膜の全ての細胞タイプを含む大きな子孫細胞のクローンを形成する。我々はこれまでの研究において、CMZの幹細胞が分泌性のシグナル分子Wntによって維持されていること、また、従来はNotchシグナリングの下流で働いていると考えられていたc-hairy1がWntの下流で働いていることなどを明らかにしてきた。本年度はWntによるc-hairy1の制御をより詳細に調べるために、c-hairy1の上流プロモーター領域をルシフェラーゼにつなぎ、このレポーターベクターを生体内の網膜にエレクトロポーレーションすることによってプロモーター解析を行った。その結果、c-hairy1の上流にWntのシグナルの活性化に応答するエレメントがあること、ほぼ同等の活性が上流0.8kbまで絞り込めることなどが分かった。
また、Wntによるc-hairy1の発現制御が網膜だけでみられる特殊な現象でなく他の神経系の領域でも働いているかどうかを調べるために、ニワトリ体幹部の神経管にWnt3aおよびWntのシグナルを負に制御する受容体Frizzledの細胞外ドメインを強制発現した。それらの個体においてc-hairy1の発現を調べたところ、前者では発現上昇、後者では発現の低下が見られた。もともとc-hairy1を発現している神経管上部のマーカーの発現にはそのような変化が見られなかったことから、神経管においてもc-hairy1はNotchシグナルでなくWntシグナルによって発現制御されている事が明らかになった。
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