組換えAMV逆転写酵素発現系の構築と蛋白質工学による生産性、活性、熱安定性の向上

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19580104
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用生物化学
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 保川 清 京都大学, 大学院・農学研究科, 准教授 (30397559)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 酵素利用学

研究概要

AMV逆転写酵素はMMLV 逆転写酵素よりも熱安定性が高く、鋳型プライマーにより強く安定化された。昆虫細胞を宿主として組換えAMV 逆転写酵素を発現させた。変異Asp505→Ala を導入するとAMV 逆転写酵素の熱安定性が向上した。

研究成果

• [雑誌論文] Characterization of Moloney murine leukaemia virus/avian myeloblastosis virus chimeric reverse transcriptases (2009)
  • 著者名/発表者名: Yasukawa, K., Mizuno, M., Inouye, K.
  • 雑誌名: J. Biochem 145 ページ: 315-324
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of the thermal stabilities of reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus (2008)
  • 著者名/発表者名: Yasukawa, K., Nemoto, D., Inouye, K.
  • 雑誌名: J. Biochem 143 ページ: 261-268
  • 査読あり
• [学会発表] 昆虫細胞で発現させた組換えAMV 逆転写酵素αサブユニットの熱安定性 (2009)
  • 著者名/発表者名: 根本大資、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2009年度日本農芸化学会大会
  • 発表場所: マリンメッセ福岡
  • 年月日: 2009-03-29
• [学会発表] MMLV およびAMV 逆転写酵素をもとに作製したキメラ酵素の酵素化学的性質の決定 (2009)
  • 著者名/発表者名: 水野匡貴、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2009年度日本農芸化学会大会
  • 発表場所: マリンメッセ福岡
  • 年月日: 2009-03-29
• [学会発表] 逆転写酵素の活性と熱安定性 (2009)
  • 著者名/発表者名: 保川清
  • 学会等名: 2009年度日本農芸化学会大会(シンポジウム : 核酸に関わる酵素の化学-基礎から応用まで)
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2009-03-29
• [学会発表] Comparison of the thermal stabilities of reverse transcriptases from avian myeloblastosis virus and Moloney murine leukaemia virus (2008)
  • 著者名/発表者名: 保川清、根本大資、井上國世
  • 学会等名: 2008年度日本分子生物学会・日本生化学会合同大会
  • 発表場所: 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2008-12-09
• [学会発表] 昆虫細胞を宿主とした組換えAMV 逆転写酵素の発現 (2008)
  • 著者名/発表者名: 根本大資、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2008年度日本農芸化学会関西支部大会
  • 発表場所: 京都学園大学
  • 年月日: 2008-09-13
• [学会発表] MMLV およびAMV 逆転写酵素をもとに作製したキメラ酵素の酵素化学的性質 (2008)
  • 著者名/発表者名: 水野匡貴、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2008年度日本農芸化学会関西支部大会
  • 発表場所: 京都学園大学
  • 年月日: 2008-09-13
• [学会発表] AMV 逆転写酵素とMMLV 逆転写酵素の熱安定性に関する熱力学的研究 (2008)
  • 著者名/発表者名: 根本大資、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2008年度日本生化学会近畿支部大会
  • 発表場所: 大阪市立大学杉本キャンパス
  • 年月日: 2008-05-24
• [学会発表] AMV 逆転写酵素とMMLV 逆転写酵素の熱安定性の比較 (2008)
  • 著者名/発表者名: 根本大資、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2008年度日本農芸化学会大会
  • 発表場所: 名城大学天白キャンパス
  • 年月日: 2008-03-28
• [学会発表] AMV 逆転写酵素とMMLV 逆転写酵素の熱安定性に関する比較研究 (2007)
  • 著者名/発表者名: 根本大資、保川清、井上國世
  • 学会等名: 2007年度日本農芸化学会関西支部・中部支部合同大会
  • 発表場所: 中部大学
  • 年月日: 2007-09-22
• [図書] 産業酵素の応用技術と最新動向(井上國世、監修)シーエムシー出版、東京 (2009)
  • 著者名/発表者名: 保川清
  • 総ページ数: 194-202
  • 出版者: 核酸増幅法