|
1. ppGpp合成遺伝子変異植物体の作製
シロイヌナズナ(A.thaliana)のppGpp合成酵素遺伝子の一種であるCRSHをクローニングし、バイナリーベクター(植物遺伝子導入用ベクター)に組み込んだ。本ベクターを導入したアグロバクテリウム(A.tumefaciens)をタバコ(N.tabacum)の葉切片に感染させた。約1ヵ月後に形成された不定芽は順化させた後、培養土に移植、栽培し、種子を得た。この種子から得られた植物体は、カナマイシン耐性を指標として選抜して、耐性のある植物体をppGpp合成酵素遺伝子過剰発現植物体とした。本遺伝子過剰発現体は現在生育中である。今後は、この遺伝子過剰発現体のCRSH遺伝子発現量の解析、表現型の観察、植物体内のppGpp量の分析により、本植物体において過剰に発現させたppGpp合成酵素が機能しているのか否かを確認する予定である。
2. 緑藻類のppGpp産生誘導物質の探索
緑藻類(C.reinhardtii)に高温、高塩濃度および紫外線などの様々な環境ストレスを与え、ppGpp合成酵素遺伝子(RSH)発現の半定量的RT-PCRおよびppGppのHPLC分析を行なったが、それらの誘導条件を確認することはできなかった。そこで、C.reinhardtiiのRSH遺伝子破壊株を作製し、その表現型等を野生株と比較することとした。RSH遺伝子破壊株は、アグロバクテリウム法により作製し、現在解析中である。
|
