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2007 年度 実績報告書

植物葉緑体のマグネシウムイオン膜輸送タンパク質の分子機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 19580126
研究機関京都府立大学

研究代表者

石嶌 純男  京都府立大学, 農学研究科, 准教授 (70184520)

キーワードマグネシウムイオン / 膜輸送タンパク質 / 葉緑体 / リポソーム / シロイヌナズナ
研究概要

1)植物Mg^<2+>膜輸送タンパク質recombinant proteinの調製
シロイヌナズナArabidopsis thaliana由来のMg^<2+>膜輸送タンパク質AtMRS2-10を大腸菌で発現し、精製した。使用頻度の低いコドンに対するtRNA過剰発現大腸菌BL21-CodonPlus(DE3)-RILをホストとし、TB培地で培養することにより、従来のLB培地で等容量培養した場合に比べ、約2.4倍の菌体量が得られ、約2.5倍のrecombinantタンパク質を得ることができた。
2)Mg^<2+>膜輸送タンパク質活性測定システムの構築
Recombinantタンパク質をリポソームに組み込み、外液にMg^<2+>を加えて一定時間インキュベーションしたのち、リポソーム内のMg含量を原子吸光分析法を用いて測定した。有意なMgの取り込みを観測することに成功したが、活性の安定性に問題があり、今後の課題として、N末端Hisタグの切断、および葉緑体輸送シグナルを欠いたrecombinantタンパク質作成の必要性が浮かび上がった。
3)大腸菌Mg^<2+>膜輸送多重変異株の作成
大腸菌においてMg^<2+>輸送に関与すると考えられる4つの遺伝子に注目し、それらの二重変異株を作成した。一部の二重変異株の成長において、外液Mg^<2+>依存性が見られ、シロイヌナズナAtMRS2-10タンパク質発現による相補性を示したが、まだ不十分であり、現在、三重変異株、四重変異株を作成中である。

  • 研究成果

    (3件)

すべて 2007

すべて 雑誌論文 (1件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Mg^<2+>要求性変異株の取得2007

    • 著者名/発表者名
      柴田 真喜子, ら
    • 雑誌名

      Journal of Biological Macromolecules 7

      ページ: 78

  • [学会発表] 大腸菌のMg^<2+>輸送システム-Mg^<2+>要求性変異株の取得-2007

    • 著者名/発表者名
      柴田 真喜子, ら
    • 学会等名
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会 合同大会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2007-12-12
  • [学会発表] Mg^<2+>要求性変異株の取得-動植物のMg^<2+>輸送システムの解明を目指して-2007

    • 著者名/発表者名
      柴田 真喜子, ら
    • 学会等名
      日本生物高分子学会2007年度大会
    • 発表場所
      海峡メッセ下関国際貿易ビル
    • 年月日
      2007-10-19

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公開日: 2010-02-04   更新日: 2016-04-21  

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