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1植物Mg^<2+>膜輸送タンパク質recombinant proteinの調製
シロイヌナズナArabidopsis thanliana由来のCorAファミリータンパク質AtMRS2-10を大腸菌で発現し、精製した。N末端にHisタグを保持したままのもの、およびHisタグを切断したものともにMg^<2+>輸送活性を示した。今後、葉緑体輸送シグナルを欠いたrecombinantタンパク質も作成、精製して、Mg^<2+>輸送活性を比較する計画である。
2Mg^<2+>膜輸送タンパク質活性測定システムの構築とキャラクタリゼーション
Recombinantタンパク質をリポソームに組み込み、外液にMg^<2+>を加えて一定時間インキュベーションしたのち、リポソーム内のMg含量を原子吸光分析法を用いて測定した。あらかじめ、リポソーム内外に正電荷イオンの濃度勾配をつくることにより、Mgの取り込みを観測することに成功した。AtMRS2-10のMg^<2+>輸送活性は、
ヘキサンコバルトによって阻害され、細菌のCorAタンパク質と共通の性質をもつことが示された。
3大腸菌Mg^<2+>膜輸送多重変異株の作成
大腸菌においてMg^<2+>輸送に関与すると考えられる4つの遺伝子に注目し、それらの多重変異株を作成した。一部の多重変異株の成長が、外液Mg^<2+>に依存することを見出した。今後、外来遺伝子による相補性実験を行い、これらタンパク質のMg^<2+>輸送機能を検討する計画である。
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