| 研究課題/領域番号 |
19580196
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
田中 裕美 近畿大学, 農学部, 教授 (30140338)
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| 研究分担者 |
榎 章郎 近畿大学, 農学部, 教授 (80027169)
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| キーワード | 白色腐朽菌 / 水酸化ラジカル / Phanerochaete chrysosporium / 木材腐朽 / 糖タンパク質 / Ceriporiopsis subvermispora |
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| 研究概要 |
数種の腐朽形態の異なる木材腐朽菌を用いた実験から、木材を分解する菌類はその腐朽形態に関わらず菌体外に2価の鉄を含む糖タンパク質を分泌し、その物質によって生成される水酸化ラジカルが木材腐朽に関与することを明らかにしてきた。そして、白色腐朽担子菌ではこの水酸化ラジカルと、他の木材成分分解酵素との協奏的作用で木材構成成分の全てを分解する。前年度までの実験により、強力なリグニン分解菌である白色腐朽菌Phanerochaete chrysosporiumから水酸化ラジカル生成物質のタンパク質部分をコードする遺伝子glp1およびglp2を得た。さらに、glp 1に関しては、5'末端および3'末端の非翻訳領域を解析し、転写開始点および2つの異なる転写終結点を解析できた。Glp 2に関しては3'末端は解析できたが、5'末端については引き続き解析中である。またpET-32 Xa/LICベクター系を用い、glp 1遺伝子を大腸菌に組み換え、タンパク質を発現させた。しかし、発現させたタンパク質を精製する条件を種々検討したが、使用する酵素が誤消化を起こす可能性やその後の精製段階でかなり長時間を必要とすることがわかった。そのため、BIO-RAD社の製品であるProfinity eXact Fusion-Tag Systemを使用し発現を試み、発現させることができた。引き続き効率よく多量に発現タンパク質を得るために、培養条件や発現条件の検討を行うとともに精製法の検討を行った。さらに、この物質を用いた環境汚染物質の分解法の確立のために、モデル化合物を用いて分解実験を行ったが、モデル化合物が水溶性でないものは反応の進行が遅いことがわかった。
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