| 研究概要 |
魚類を含む脊椎動物の成長には、インスリン様成長因子(insulin-like growth factor, IGF)-Iが重要な役割を果たしている。しかし、IGF-Iの生理活性は6種類のIGF結合蛋白(IGF-binding protein,IGFBP)によって厳密に調節されている。これらのIGFBPの機能はタイプにより異なるが、大まかにIGF-Iを介した成長の「促進型」と「阻害型」に分けられる。サケ科魚類の血中には少なくとも3種類のIGFBPが検出されるが、それぞれがどのタイプに相当するのかは非常に混乱している。本研究はこれらのIGFBPの同定を行い、機能解析を行うことを目的としている。本年度は、サケ科魚類の血中IGF-Iの主要な運搬役であり、成長の「促進型」と考えられている41kDaのIGFBP(41KBP)のcDNAクローニングを行った。精製41KBPのN末端部分アミノ酸配列を元に縮重プライマーを設計し、肝臓から調製した一本鎖cDNAを鋳型にPCR行った。得られたcDNA断片の配列を元に遺伝子特異プライマーを再設計し、RACE法(Rapid Amplification of cDNA Ends)により全長cDNAを得た。その演繹アミノ酸配列から、41KBPは哺乳類においては「阻害型」とされるIGFBP-2であることが分かった。これまで41KBPは成長の「促進型」であるIGFBP-3と考えられていたため、次にサケIGFBP-3のcDNAクローニングを行った。他の動物種で保存されている配列を元に縮重プライマーを設計し、上と同様の方法で5末端を含むサケIGFBP-3のcDNA断片を得た。その配列を41KBPと比較したところ、両者は異なることが確認された。これらの結果から、サケ科魚類の41KBPは、従来考えられていたIGFBP-3ではなくIGFBP-2であることが明らかになった。
|
