リン酸基認識能を持つナノ分子をツールとした遺伝子多型検出法の開発

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19590040
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 木下 英司 広島大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 准教授 (80304418)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: ゲノム / 遺伝子多型 / 一塩基多型(SNP) / リン酸 / 電気泳動 / フォスタグ(Phos-tag)

研究概要

研究代表者は, リン酸基に選択的な親和性をもつ機能性ナノ分子(フォスタグ, Phos-tag)を用いた新しい一塩基多型(SNP)検出法を開発した。この方法では, Phos-tagを共重合させた電気泳動用ポリアクリルアミドゲルを使用する。この方法により, ミニゲルクラスの電気泳動装置で, ほぼ100%の精度でSNPタイピングができる。本法が, 遺伝子多型の基礎研究分析や臨床診断に貢献できるものと期待している。

研究成果

• [雑誌論文] Phosphate-affinity gel electrophoresis using a Phos-tag molecule for phosphoproteome study (2009)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T.
  • 雑誌名: Curr. Proteomics Proteomics (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysates (2009)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T.
  • 雑誌名: Anal. Biochem (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phosphopeptides (2009)
  • 著者名/発表者名: Takiyama, K., Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Fujioka, Y., Kubo, Y., and Koike, T.
  • 雑誌名: Anal. Biochem (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthetic ciguatoxins selectively activate NAv1. 8-derived chimeric sodium channels expressed in HEK293 cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Yamaoka, K., Inoue, M., Miyazaki, K., Hirama, M., Kondo, C., Eiji Kinoshita, Miyoshi, H., and Seyama
  • 雑誌名: J. Biol. Chem. 284 ページ: 7597-7605
  • 査読あり
• [雑誌論文] A synthetic approach to develop peptide inhibitors selective for brain-type sodium channels on the basis of pompilidotoxin structure (2009)
  • 著者名/発表者名: Yokote, S., Setoguchi, R., Shimizu, E., Mishima, N., Kawahara, K., Kuniyasu, A., Shirasaki, T., Takahama, K., Konno, K., Kawai, N., Yamaoka, K., Eiji Kinoshita, and Nakayama, H.
  • 雑誌名: Heterocycles 79 ページ: 925-933
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two-dimensional phosphate-affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Matsubara, M., Aoki, Y., Ohie, S., Mouri, Y., and Koike, T.
  • 雑誌名: Electrophoresis 30 ページ: 550-559
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of phosphorylation on large proteins by Western blotting using Phos-tag containing gel. Nat. Protoc (2008)
  • 著者名/発表者名: Tomida, J., Kitao, H., Eiji Kinoshita, and Takata M.
  • 雑誌名: 232(doi : 10. 1038/nprot)
  • 査読あり
• [雑誌論文] FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway (2008)
  • 著者名/発表者名: Ishiai, M., Kitao, H., Smogorzewska, A., Tomida, J., Kinomura, A., Uchida, E., Saberi, A., Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Koike, T., Tashiro, S., Elledge, S.J., and Takata, M.
  • 雑誌名: Nat. Struct. Mol. Biol 15 ページ: 1138-1146
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of the Gua/Cyt-to-Cyt/Gua mutation in a Gua/Cyt-lined sequence using Zn^<2+>-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Yoshimoto, M., and Koike, T.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 380 ページ: 122-127
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE (2008)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Matsubara, M., Yamada, S., Nakamura, H., Shiro, Y., Aoki, Y., Okita, K., and Koike, T.
  • 雑誌名: Proteomics 8 ページ: 2994-3003
  • 査読あり
• [雑誌論文] A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (2008)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita-Kikuta, E., Eiji Kinoshita, and Koike, T.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 378 ページ: 102-104
  • 査読あり
• [雑誌論文] Novel type of phosphate-affinity electrophoresis for protein kinase profiling (2007)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Aoki Y., and Koike, T.
  • 雑誌名: Seibutsu Seibutsu-butsuri butsuri-kagaku 51 ページ: 199-206
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification on membrane and characterization of phosphoproteins using an alkoxide-bridged dinuclear metal complex as a phosphate binding tag molecule (2007)
  • 著者名/発表者名: Nakanishi, T., Ando, E., Furuta, M., Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., Koike, T., Tsunasawa, S., and Nishimura, O.
  • 雑誌名: J. Biomol. Tech. 18 ページ: 278-286
  • 査読あり
• [雑誌論文] A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis (2007)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Kinoshita-Kikuta, E., and Koike, T.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 361 ページ: 294-298
  • 査読あり
• [雑誌論文] リン酸基アフィニティー電気泳動法を利用した遺伝子診断法 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 雑誌名: 実験医学 25 ページ: 3033-3039
• [雑誌論文] リン酸基アフィニティー電気泳動法を利用した細胞内タンパク質リン酸化反応の解析法 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 雑誌名: 実験医学 25 ページ: 1229-1235
• [雑誌論文] リン酸基親和性クロマトグラフィーを用いた細胞内のリン酸化タンパク質の網羅的精製 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 雑誌名: バイオテクノロジージャーナル 7 ページ: 217-220
• [学会発表] リン酸基結合ナノ分子を利用した高感度・高効率なエピジェネティクス変異検出技法の創成 (2009)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 中島弘美, 氏原弘洋, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第129年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 2009-03-26
• [学会発表] リン酸基親和性電気泳動法を利用した同じリン酸化量を有するリン酸化蛋白質異性体の分離検出 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 松原 守, 山田斉爾, 中村寛夫, 城 宜嗣, 青木悠里, 沖田鋼季, 小池透
  • 学会等名: BMB2008
  • 発表場所: 神戸国際展示場
  • 年月日: 2008-12-12
• [学会発表] リン酸基親和性電気泳動法を利用した新しい遺伝子診断技術 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池透
  • 学会等名: 日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 麻布大学百周年記念ホール
  • 年月日: 2008-11-16
• [学会発表] フォスタグ結合型新規リン酸基アフィニティービーズを利用した細胞抽出液からのリン酸化蛋白質の分離と濃縮 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 山田篤志, 井上知香, 小池透
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第6回大会
  • 発表場所: ホテル阪急エキスポパーク
  • 年月日: 2008-07-29
• [学会発表] Phosphate Affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study in Cancer Cells (2008)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita
  • 学会等名: BIT's Annual World Cancer Congress-2008
  • 発表場所: Everbright Convention & Exhibition Center, 上海市, 中華人民共和国
  • 年月日: 2008-06-12
• [学会発表] ウェスタンブロッティング膜に転写されたリン酸化蛋白質の検出とダイレクト膜上質量分析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 中西豪, 安藤英治, 古田大, 綱澤進, 西村紀, 小池透
  • 学会等名: 日本薬学会第128年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2008-03-28
• [学会発表] フォスタグを用いたリン酸化蛋白質の解析~リン酸基認識素子としての二核錯体とその応用~ (2008)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 大阪大学蛋白質研究所セミナー「蛋白質翻訳後修飾」
  • 発表場所: ホテル阪急エキスポパーク
  • 年月日: 2008-01-10
• [学会発表] リン酸化蛋白質解析のための新しい二次元電気泳動法 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 青木悠里, 大家志織, 毛利由佳, 松原守, 小池透
  • 学会等名: BMB2007
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2007-12-12
• [学会発表] Tohru Koike Phosphate affinity gel electrophoresis using a phosphate-binding tag molecule, Phos-tag, for protein kinase and phosphatse profiling (2007)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta
  • 学会等名: The 4th Takeda Science Foundation Symposium on PharmaSciences
  • 発表場所: シェラトン都ホテル東京
  • 年月日: 2007-12-03
• [学会発表] 遺伝子変異を認識する機能性分子を用いた遺伝子診断技術の開発 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 由元実希, 小池透
  • 学会等名: 第58回日本電気泳動学会総会
  • 発表場所: 宇部全日空ホテル
  • 年月日: 2007-11-09
• [学会発表] リン酸化プロテオーム研究の新戦略 (2007)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 学会等名: 日本ヒトプロテオーム機構第5回大会
  • 発表場所: 日本科学未来館
  • 年月日: 2007-07-30
• [図書] Single Nucleotide Polymorphisms
  • 著者名/発表者名: Emiko Kinoshita-Kikuta, Eiji Kinoshita, and Tohru Koike
  • 出版者: Zn(II)-Cyclen Polyacrylamide Gel Electrophoresis for SNP Detection(2d Edition, Chapter 11, Humana Press(in press))
• [図書] Single Nucleotide Polymorphisms
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta, and Tohru Koike
  • 出版者: Phosphate-Affinity Polyacrylamide Gel Electrophoresis for SNP Genotyping(2d Edition, Chapter 11, Humana Press(in press))