癌悪性化に関与するGPR48の新規分子標的としての評価

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19590064
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生物系薬学
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 北川 恭子 浜松医科大学, 医学部, 助教 (20299605)
• 研究分担者: 北川 雅敏 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50294971)
• 連携研究者: 北川 雅敏 浜松医科大学, 医学部, 教授 (50294971)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 分子生物学

研究概要

細胞浸潤能変化
invasion assayによりGPR48発現量に正相関した浸潤能の亢進が細胞レベルで認められていたため、そのメカニズムを探るため、細胞運動能の変化をscratch assayで調べた。使用した恒常発現株のGPR48発現量は株間で様々であったが、運動能との相関性は見出せなかった。さらに浸潤能亢進レベルも対照群と有為差が認められなくなった。このため、細胞外マトリックス分解能などの測定も計画していたが中止とした。
発癌促進効果
GPR48遺伝子を導入した培養細胞でcolony formation assayとfocus assayを行い、GPR48発現亢進による発癌性への寄与を検討したが、発癌促進効果は認められなかった。しかし細胞レベルでの研究から、GPR48は癌の悪性度を促進する作用を示した。
GPR48トランスジェニックマウスの解析
全身性発現型トランスジェニックマウスの作成に成功し、外来性GPR48発現臓器の異なる3ラインを得た。個体レベルでの機能解析は、ノックアウトマウスにおいて発育不全や腎臓形成不全が認められているが、全身性発現型GPR48トランスジェニックマウスでは発育程度、腎形成の異常は出現せず、長期通常飼育下で癌その他の疾患の発生の傾向は認められなかった。
我々はこれまでの他の研究プロジェクトにより、p27のユビキチンプロテアソームシステムによる分解の基質認識タンパクであるSkp2ホモノックアウトマウスは、尿管結紮による腎不全モデル(UUO マウス)を作成すると腎障害レベルがヘテロまたはホモ野生型と比較して著明に軽減されていることを見出していた。このような表現系の発現に、Skp2によるp27分解の抑制、さらにGPR48発現量の上昇が関与している可能性を考え、GPR48トランスジェニックマウスでUUOを作成して組織学的に解析した。その結果、腎障害の程度はコントロールUUOマウスと同等であり、Skp2ノックアウトマウスで見られた腎の特徴はGPR48を介してはいないと考えられた。これらのマウスを用いた結果から、GPR48はp27の下流因子の一つではあるものの、腎障害および発癌の過程においてGPR48がp27下流の主経路に関与している可能性は低いと思われた。

研究成果

• [雑誌論文] Effects of 5-week ethanol feeding on the liver of aldehyde dehydrogenase 2 knockout mice (2008)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto, A, Kawamoto, T, Mutoh,F, Isse, T, Oyama, T, Kitagawa, K, Nakayama, K.-i.and Ichiba, M.
  • 雑誌名: Pharmacogenet Genomics 18(10) ページ: 847-52
• [雑誌論文] Increased frequencies of micronucleated reticulocytes and T-cell receptor mutation in Aldh2 knockout mice exposed to acetaldehyde (2008)
  • 著者名/発表者名: Kunugita, N, Isse, T, Oyama, T, Kitagawa, K, Ogawa, M, Yamaguchi,T, Kinaga, T,and Kawamoto, T.
  • 雑誌名: J.Toxicol. Sci 33(1) ページ: 31-6
• [雑誌論文] TSU68 prevents liver metastasis of colon cancer xenografts by modulating the pre-metastatic niche (2008)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto, M, Kikuchi, H, Ohta, M, Kawabata, T, Hiramatsu, Y, Kondo, K, Baba, M, Kamiya, K, Tanaka, T, Kitagawa and M. Konno H.
  • 雑誌名: Cancer Res 68 ページ: 9754-9762
• [雑誌論文] Intrarenal RAS activity and urinary angiotensinogen excretion in anti-thymocyte serum nephritis rats (2008)
  • 著者名/発表者名: Ohashi, N, Yamamoto, T, Huang, Y, Misaki, T, Fukasawa, H, Suzuki, H, Togawa, A, Suzuki, S, Fujigaki, Y, Nakagawa, T, Nakamura, Y, Suzuki, F, Kitagawa, M, Hishida, A.
  • 雑誌名: Am J.Physiol Renal Physiol 295 ページ: 1512-1518
• [雑誌論文] Novel insights into FGD3, a putative GEF for Cdc42, that undergoes SCF^<FWD1/b-TrCP>-mediated proteasomal degradation analogous to that of its homologue FGD1 but regulates cell morphology and motility differently from FGD1 (2008)
  • 著者名/発表者名: Hayakawa, M, Matsushima, M, Hagiwara, H, Oshima, T, Fujino, T, Ando, K, Kikugawa, K, Tanaka, H, Miyazawa,K.and Kitagawa, M.
  • 雑誌名: Genes to Cells 13 ページ: 329-442
• [雑誌論文] Pirh2 interacts with and ubiquitylates signal recognition particle receptor beta subunit (2008)
  • 著者名/発表者名: Abe, K, Hattori, T, Isobe, T, Kitagawa, K, Oda, T, Uchida, C.and Kitagawa, M.
  • 雑誌名: Biomed Res 29 ページ: 53-60
• [雑誌論文] Stress via p53 pathway causes apoptosis by mitochondrial Noxa upregulation in doxorubicin-treated neuroblastoma cells (2008)
  • 著者名/発表者名: Kurata, K, Yanagisawa, R., Ohira, M. Kitagawa, M, Nakagawara, A, Kamijo, T.
  • 雑誌名: Oncogene 27 ページ: 741-754
• [雑誌論文] Regulation of TGF-beta signaling by Smads and its roles in tissue fibrosis (2008)
  • 著者名/発表者名: Fukasawa, H. Yamamato, T. Kitagawa, M. and Hishida A.
  • 雑誌名: Current signal transduction therapy 3 ページ: 1-6
• [雑誌論文] Reproductive Toxicity of Ethylene Glycol Monoethyl Ether in Aldh2 Knockout Mice (2007)
  • 著者名/発表者名: Wang, R.S, Ohtani, K, Suda, M, Kitagawa, K, Nakayama, K.-I, Kawamoto, T,and Nakajima, T.
  • 雑誌名: Industrial Health 45(4) ページ: 574-578
• [雑誌論文] Increased formation of hepaticN2-ethylidene-2'-deoxyguanosine DNA adducts in aldehyde dehydrogenase 2 knockout mice treated with ethanol (2007)
  • 著者名/発表者名: Matsuda, T, Matsumoto, A, Uchida, M, Kanaly, R., Misaki, K, Shibutani, S, Kawamoto, T, Kitagawa, K, Nakayama, K.-I, Tomokuni, K,and Ichiba, M.
  • 雑誌名: Carcinogenesis 28(11) ページ: 2363-2366
• [雑誌論文] Pirh2 Promotes Ubiquitin-Dependent Degradation of the CDK Inhibitor p27Kip1 (2007)
  • 著者名/発表者名: Hattori, T, Isobe, T, Abe, K, Kikuchi, H, Kitagawa, K, Oda, T, Uchida, C,and Kitagawa, M.
  • 雑誌名: Cancer Research 67 ページ: 10789-10795
• [雑誌論文] Critical and functional regulation of CHOP(C/EBP homologous protein)through the N-terminal portion (2007)
  • 著者名/発表者名: Ohoka, N, Hattori, T, Kitagawa, M, Onozaki, K,and Hayashi H.
  • 雑誌名: J Biol Chem 282 ページ: 35687-35694
• [雑誌論文] Contribution of Extracellular Signal-Regulated Kinases to the IL-1-induced Growth Inhibition of Human Melanoma Cells A375 (2007)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, T, Yamamura, T, Hattori, T, Hayashi H, Mori, A, Yoshida, A, Uchida, C, Kitagawa, M, and Onozaki, K.
  • 雑誌名: International Immunopharmacology 8 ページ: 80-89
• [雑誌論文] Cys-881 is essential for the trafficking and secretion of truncated mutant ceruloplasmin in aceruloplasminemia (2007)
  • 著者名/発表者名: Kono, S, Suzuki, H, Oda, T, Takahashi, Y, Shirakawa, K, Takahashi, Y, Kitagawa, M,and Miyajima, H.
  • 雑誌名: J. Hepatology 47 ページ: 844-850
• [雑誌論文] Effect of loss of heterozygosity of the c-kit gene on prognosis after hepatectomy for metastatic liver gastrointestinal stromal tumors (2007)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi, H, Yamamoto, M, Hiramatsu, Y, Baba, M, Ohta, M, Kamiya, K, Tanaka, T, Suzuki, S, Sugimura, H, Kitagawa, M, Kanai, T, Kitayama, Y, Kanda, T, Nishikura, K,and Konno, H.
  • 雑誌名: Cancer Sci 98 ページ: 1734-1739
• [雑誌論文] ARA54 is involved in transcriptional regulation of the cyclin D1 gene in human cancer cells (2007)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi, H, Uchida, C, Hattori, T, Isobe, T, Hiramatsu, Y, Kitagawa, K, Oda, T, Konno, H,and Kitagawa, M.
  • 雑誌名: Carcinogenesis 28 ページ: 1752-1758
• [雑誌論文] Renal damage in obstructive nephropathy is decreased in Skp2-deficient mice (2007)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, S, Fukasawa, H, Kitagawa, K, Uchida, C, Hattori, T, Isobe, T, Oda, T, Misaki, T, Ohashi, N, Nakayama, K, Nakayama, K.I., Hishida, A., Yamamoto, T,and Kitagawa, M.
  • 雑誌名: Am.J.Pathol 171 ページ: 473-483
• [雑誌論文] Phosphorylation of pRB at Ser612 by Chk1/2 leads to a complex between pRB and E2F-1 after DNA damage (2007)
  • 著者名/発表者名: Inoue, Y, Kitagawa, M,and Taya, Y.
  • 雑誌名: EMBO J 26 ページ: 2083-2093
• [雑誌論文] Genetically engineered neural stem cells migrate and suppress glioma cell growth at distant intracranial sites (2007)
  • 著者名/発表者名: Li, S, Gao, Y, Tokuyama, T, Yamamoto, J, Yokota, N, Yamamoto, S, Terakawa, S, Kitagawa, M,and Namba, H.
  • 雑誌名: Cancer Letters 251(2) ページ: 220-227
• [学会発表] GPR48による癌転移機構の解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 磯部智康, 島田真衣, 劉寧, 北川恭子, 鈴木小由里, 小田敏明, 服部隆行, 内田千晴, 北川雅敏
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会、第81回日本生化学会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-12-10
• [学会発表] タンパク質過剰発現誘導性小胞体の構造と機能 (2008)
  • 著者名/発表者名: 小田敏明, 服部隆行, 磯部智康、北川恭子, 内田千晴, 横田貞記, 北川雅敏
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会、第81回日本生化学会合同大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2008-12-09
• [学会発表] 細胞周期制御分子p27のユビキチン依存的分解機構と病態 (2007)
  • 著者名/発表者名: 北川雅敏
  • 学会等名: 第30回日本分子生物学会第80回日本生化学会合同大会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2007-12-12
• [学会発表] Novel regulatory mechanisms of Cyclin D1 expression (2007)
  • 著者名/発表者名: Kitagawa, M, et.al.
  • 学会等名: 第66回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2007-10-05
• [学会発表] 癌関連核内因子のユビキチン依存的制御機構 (2007)
  • 著者名/発表者名: 北川雅敏
  • 学会等名: Nuclear Signaling JAPAN 2007シンポジウム
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2007-07-13