| 研究概要 |
細胞間情報伝達因子CCNファミリーに属するCCN1,2,3蛋白質は,繊維芽細胞・内皮細胞などに作用し,細胞の増殖・接着・遊走・細胞外基質産生を調節する多機能因子である.これら3種類のCCN蛋白質は,それぞれ重複した生理活性を有するとともに,独自の生理活性を持つ.また,これら3種類の蛋白質同士で相反する生理活性を持つものもある.本研究は,CCNファミリー蛋白質の構造と機能発現相関の理解を目指し,「CCN1,2,3蛋白質及びそのバリアント蛋白質を結晶化,X線構造解析を行い,CCN1,2,3蛋白質及びそのバリアント蛋白質の立体構造を解明する」ことを目的とした.この目的達成のため,シャペロン蛋白質DnaKJ,GrpE,GroELSとの共発現によるCCN1,2,3組換え蛋白質の大腸菌での可溶性発現系を構築し,組換え蛋白質の大量発現・精製を行った.精製途中で大部分の組換え蛋白質は凝集してしまい,可溶状態にある組換え蛋白質を大量に得られなった.また,可溶な状態を維持させようと試みたが,改善は見られなかった.これらの結果は,大腸菌内で可溶性発現した組換え蛋白質がnativeなフォールディング状態でなかったことを示唆している.結晶化を行うために必要な十分量の組換え蛋白質が得られておらず,現在ヒトCCN1,2,3遺伝子をBrevibacillus発現系および昆虫細胞発現系用プラスミドに再クローニングし,Brevlbaczllusおよび昆虫細胞発現系の構築を進めている.最終的にはCCN1,2,3蛋白質及びそのバリアント蛋白質の結晶化及び立体構造の解明を目指したい.
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