上皮細胞における新規 NADPH oxidase 活性化機構の解明

2008 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 19590278
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 医化学一般
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 上山 健彦 神戸大学, 自然科学系先端融合研究環バイオシグナル研究センター, 講師 (80346254)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• キーワード: 活性酸素 / NADPH oxidase / 感染症

研究概要

近年、上皮細胞における活性酸素の産生が報告され、続いて組織特異的に存在する新規NADPH oxidase(Nox: 7種類) が確認され、その生理機能やその機能異常によって引き起こされる疾患などに注目が集っている。本研究では、新規Noxの活性化機構の詳細を、遺伝子操作マウスや操作マウス由来の細胞などを用いて解明することを試みた。
その結果、
1. 生細胞を用いて、共焦点レーザー顕微鏡下で、可視化により蛋白質相互作用を検知できる新規蛍光蛋白質システム(complementation-based method using a monomeric coral fluorescent protein: mKG system)を開発し、その有用性をNox複合体の相互作用を用いて証明し、報告した。
2. 遺伝子操作マウス由来の初代培養細胞とレンチウイルスを用いた Nox の再構築系の確立に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] Sequential binding of cytosolic phox proteins to phagosomes through regulated adaptor proteins: evaluation using the novel monomeric Kusabira-Green system and live imaging of phagocytosis (2008)
  • 著者名/発表者名: Ueyama T, Kusakabe T, Karasawa S, Kawasaki T, Shimizu A, Son J, Leto TL, Miyawaki A, Saito N
  • 雑誌名: J Immunol. 181 ページ: 629-640
• [雑誌論文] Enzymological analysis of mutant protein kinase C gamma causing spinocerebellar ataxia type 14 and dysfunction in Ca2+ homeostasis (2008)
  • 著者名/発表者名: Adachi N, Kobayashi T, Takahashi H, Kawasaki T, Shirai Y, Ueyama T, Matsuda T, Seki T, Sakai N, Saito N.
  • 雑誌名: J Biol Chem, 283 ページ: 19854-19863
• [雑誌論文] Regulation of clathrin dependent endocytosis by diacylglycerol kinase delta-importance of kinase activity and binding to AP2alpha (2008)
  • 著者名/発表者名: Kawasaki T, Kobayashi T, Ueyama T, Shirai Y, Saito N
  • 雑誌名: Biochem J 409 ページ: 471-479
• [雑誌論文] Ca2+ oscillation induced by P2Y2 receptor activation and its regulation by a neuron-specific subtype of PKC (・PKC) (2008)
  • 著者名/発表者名: Ashida N, Ueyama T, Rikitake K, Shirai Y, Eto M, Kondoh T, Kohmura E, Saito N
  • 雑誌名: Neurosci Lett 446 ページ: 123-128
• [雑誌論文] 新規アダプター蛋白質(Noxo1, Noxa1)の構造と機能 (2008)
  • 著者名/発表者名: 上山健彦, 齋藤尚亮
  • 雑誌名: G.I. Research(先端医学社) 16 ページ: 208-213
• [学会発表] Sequential binding of cytosolic phox complex to phagosomes through regulated adaptor proteins (2008)
  • 著者名/発表者名: Ueyama T, Kusakabe T, Karasawa S, Kawasaki T, Shimizu A, Son J, Leto TL, Miyawaki A, Saito N
  • 学会等名: Gordon Research Conferences (NADPH oxidase)
  • 発表場所: Colby-Sawyer College, NH, USA
  • 年月日: 20080601-07
• [学会発表] Nox2 活性化時におけるphox蛋白複合体の食胞膜へのターゲティング機構 (2008)
  • 著者名/発表者名: 上山健彦, 他8名
  • 学会等名: 第81回日本薬理学会年会
  • 発表場所: パシヒィコ横浜
  • 年月日: 2008-03-19
• [学会発表] A regulated adaptor function of p40phox: Intramolecular interaction (PX-PB1 domain) within p40phox (2007)
  • 著者名/発表者名: Ueyama T, Tatsuno T, Kawasaki T, Leto TL, Saito N
  • 学会等名: Gordon Research Conferences (Phagocytes)
  • 発表場所: Bryant University, Smithfield, RI, USA
  • 年月日: 20070610-15