研究課題
本研究は、糖尿病の病態に関わる蛋白質の複数の翻訳後修飾を、特異的なプローブを同時に用いて多重検出し、糖尿病診断の新規マーカー候補を探索することが目的である。これを実現する基本技術は、(1)アガロース二次元電気泳動(2-DE)法、(2)ウェスタンブロッティング(WB)法、(3)量子ドット法、および(4)蛍光波長の異なる量子ドットを別々に検出する分光技術の4つである。(1)と(2)の技術はすでに確立したので、本年度は(3)と(4)の技術を確立することに集中した。糖尿病ラット骨格筋から抽出した蛋白質をアガロース2-DE法で展開し、WB法でPVDF膜に転写した。2種類の量子ドットでカルボニル化とユビキチン化を別々にラベルし、卓上複合照射装置でPVDF膜に紫外線を照射し、各々の量子ドットを別々の波長のバンドパスフィルターを通して検出した。2枚の蛍光画像が得られたので、それらを1枚の画像に重ね合わせることによって2種類の翻訳後修飾の同時検出を行った。また、個々のタンパク質の蛍光染色パターンを比較してみたところ、カルボニル化蛋白質の多くがユビキチン化されていなかった。特に、アクチンはカルボニル化蛋白質が生じているにもかかわらず、抗ユビキチン抗体では検出されなかった。変性タンパク質はユビキチン化されてプロテアソームに運ばれ、そこで分解されるという考え方が定説になっているが、糖尿病ラット骨格筋においては、アクチンを含むカルボニル化蛋白質の多くが分解されずに細胞内に蓄積されていることが示唆された。上記2種類の翻訳後修飾のほかに、3種類目の翻訳後修飾として蛋白質の糖化(HHE 化:4-hydroxy-2-hexanal)を抗HHEマウスモノクローナル抗体と抗マウスIgG抗体結合一量子ドットで標識し、上記2種の標識とあわせて合計3種類の翻訳後修飾を同時に検出することに成功した。
すべて 2008 2007
すべて 雑誌論文 (5件) (うち査読あり 5件) 学会発表 (4件) 図書 (1件)
Proteomics Clinical Applications 2
ページ: 327-337
Journal of Electrophoresis 52
ページ: 9-17
ページ: 19-24
Journal of Chromatography B 849
ページ: 211-222
Alcohol Clinical Experimental Research 31
ページ: S67-71
