| 研究課題/領域番号 |
19590404
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| 研究機関 | 慶應義塾大学 |
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研究代表者 |
望月 早月 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (80365428)
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| 研究分担者 |
岡田 保典 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (00115221)
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| キーワード | ADAM / von Willebrand factor / 癌細胞増殖 / ADAMTS / アポトーシス / Yeast two-hybrid / 癌浸潤・転移 / 細胞外マトリックス |
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| 研究概要 |
ADAM(a disintegrin and metalloproteinase)は、MMP(matrix metalloproteinase)近縁遺伝子ファミリーであり、MMPと同様にADAMの癌細胞増殖・浸潤・転移への関与が注目されている。本研究では、ADAM28の浸潤・転移に関わる分子をクローニングするためにyeast two-hybrid systemを行い、ADAM28結合蛋白質の候補としてvWF(von Willebrand factor)を見出した。その結果、proADAM28とvWFは結合するのみならず、活性型ADAM28はvWFマルチマーを低分子化することが明らかとなった。vWFの分解酵素としてADAMTS13が知られているが、N末アミノ酸シークエンスの結果、ADAM28はvWFをADAMTS13とは別の部位で切断していた。ADAM28高発現肺癌細胞株(PC-9)をvWFで処理したところ、アポトーシスは観察されないが、非発現細胞株(A549)細胞ではvWFによりアポトーシスが促進した。また、PC-9細胞をADAM阻害剤やADAM28 siRNA処理でADAM28の発現や活性を抑制するとvWF誘導性のアポトーシス促進が認められた。vWFで処理したPC-9培養上清でvWF分解が促進していたが、A549でvWFの分解は見られなかった。次いで、ADAM28の癌細胞浸潤.転移への関与をin vivoで証明するためにルシフェラーゼを恒常的に発現させたADAM28高発現安定細胞株(PC-9^<Luc>)をマウスの尾静脈から注入し、ルシフェリン投与後その発光を体外から計測して癌細胞の浸潤・転移を経時的、定量的にモニタリングする検討を行った。その結果、癌細胞の注入後2週間で肺に定着し、3週間で大腿骨での集積が見られた。さらに、ADAM28siRNA/アテロコラーゲンの複合体をマウスの尾静脈から注入すると癌細胞の浸潤・転移が80-90%抑制された。以上のことから、ADAM28は血中でvWFと結合すると癌細胞表面でvWFを分解し、vWF誘導性のアポトーシスを回避することで癌細胞浸潤・転移促進に働く可能性がin vitroとin vivoで示唆された。
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