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CD69分子は早期活性化マーカー分子としてリンパ球の活性化の指標として広く用いられており、炎症反応の誘導や維持において重要な役割を果たしていると考えられるが、機能の詳細は明らかにされていない。本研究では、CD69分子の役割とその発現様式に関する解析およびCD69リガンド分子のクローニングを試み、今年度に以下の結果を得た。
1、腸管炎症部位でのCD69分子の発現細胞の解析
マウスでの腸炎モデルとして、デキストラン硫酸を飲水に混ぜて飲ませ、急性腸炎を誘導する系を用いた。CD69ノックアウトマウスでは炎症が起こらないことが明らかとなった。腸管炎症部位に浸潤する細胞群のうち、どのような細胞上に発現するCD69分子が腸炎の発症に重要であるか調べるために、正常マウスからT細胞やB細胞、好中球、マクロファージを精製し、CD69ノックアウトマウスに移入し腸炎を誘導して症状を比較した。その結果、正常マウスのT細胞を移入した場合に腸炎が誘導され、T細胞上のCD69分子が腸炎の発症に重要であることが明らかとなった。
2、アレルギー性喘息モデルを用いたCD69分子の発現様式に関する解析
アレルギー性喘息モデルを用いて気道炎症誘導後、経時的に組織切片を作製し、抗CD69抗体を用いて免疫染色した。Th2細胞は、GFPを恒常的に発現しているGFP TgマウスのTh2細胞を用いた。抗原吸入後の肺へのTh2細胞浸潤を調べたところ、好酸球など他の炎症細胞の浸潤に先んじて24時間以内に起こることが明らかとなった。また肺に浸潤したTh2細胞はfocusを形成し、好酸球浸潤にともなう炎症巣の形成を制御していることが明らかとなった。さらに肺に浸潤したTh2細胞で特異的にCD69の発現がみられた。
3、CD69リガンド分子のクローニング
soluble CD69分子を用いた培養細胞の染色で陽性の細胞よりcDNAライブラリーを作製し、ウイルス発現ベクターに組み込んで培養細胞に感染させsoluble CD69分子で染色する方法で陽性クローンを同定した。
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