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2008 年度 研究成果報告書

mRNAイメージングによる白血病治療後の微少残存病変生細胞の同定法と網羅的な特性解析

研究課題

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研究課題/領域番号 19590552
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 病態検査学
研究機関浜松医科大学

研究代表者

竹下 明裕  浜松医科大学, 医学部, 准教授 (00242769)

研究分担者 竹下 香  浜松医科大学, 医学部附属病院, 医員 (30397393)
前川 真人  浜松医科大学, 医学部, 教授 (20190291)
研究期間 (年度) 2007 – 2008
キーワード白血病 / 微少残存病変 / mRNA / flow cytometry
研究概要

特定の白血病細胞の分画の検出と分離を施行するため、細胞内のmRNAの染色を試みた。QUAL/FRET(quenched autoligating/fluorescence resonance energy transfer)法を改良し、蛍光probeの導入技術や反応時間の調整など多方面の改良を施行した。適切なdonor probe とacceptor probeを設定し、energy transferにて得られた特異的蛍光を検出しようとした。標的分子(mRNA)をWT1とし、白血病細胞の同定と分離を生細胞の状態で行う可能性を模索した。作成されたprobeの細胞膜の透過性を一時的に高めるためstreptlysin O(SLO)を使用した。SLOの至適濃度の決定に関しては細胞や試薬の状態などによる再現性の低下を防止するため、probe導入前にSLOの処理濃度の最適化実験を行い、flow cytometryにて検討した。培養細胞では細胞内蛍光の増加を認め、WT1が特異的に検出できると考えられた。しかし、WT1の発現が本来非常に弱いとされている正常のリンパ球における蛍光がprobe量の増加とともに増加し、non-specificな蛍光をより低下させる必要性がでてきた。Non-specificな蛍光の原因を検討するため、分子量を変えたprobeを設計して細胞内に導入した。またprobeが核内へ移行することも考えられたため、probeに接着させる蛍光物質の量を変化させ検討している。

  • 研究成果

    (12件)

すべて 2009 2007 その他

すべて 雑誌論文 (7件) 学会発表 (4件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] Effective blood utilization via system for massive blood transfusion, including cardiovascular operation in local areas2009

    • 著者名/発表者名
      Takeshita A, Asai T, Murakami M, Fujihara H, Ishizuka T, Nakai S, Yamada C, Suzumura T, Uchiyama Y, Maekawa M, Shigeno K, Washiyama N, Yamashita K, Unno N, Shinjo K
    • 雑誌名

      Jpn J Transfusion and Cell Therapy 55

      ページ: 64-67

  • [雑誌論文] Pharmacokinetics of arsenic species in Japanese patients with relapsed or refractory acute promyelocytic leukemia treated with arsenic trioxide2007

    • 著者名/発表者名
      Fujisawa S, Ohno R, Shigeno K, Sahara N, Nakamura S, Naito K, Kobayashi M, Shinjo K, Takeshita A, Suzuki Y, Hashimoto H, Kinoshita K, Shimoya M, Kaise T, Ohnishi K
    • 雑誌名

      Cancer Chemother Pharmacol 54

      ページ: 485-493

  • [雑誌論文] A randomized study with or without intensified maintenance chemotherapy in patients with acute promyelocytic leukemia who have become negative for PML-RARα transcript after consolidation therapy : The Japan Adult Leukemia Study Group(JALSG)APL97 study2007

    • 著者名/発表者名
      Asou N, KIshimoto Y, Kiyoi H, Okada M, Kawai Y, Tsuzuki M, Horikawa K, Matsuda M, Shinagawa K, Ohtake S, NishimuraM, Takahashi M, Yagasaki F, Takeshita A, Kimura Y, Iwanaga M, Naoe T, Ohno R
    • 雑誌名

      Blood 110

      ページ: 59-66

  • [雑誌論文] Phase I Trial of FLAGM with High Doses of Cytosine Arabinoside for Relapsed, Refractory Acute Myeloid Leukemia : Study of the Japan Adult Leukemia Study Group(JALSG)2007

    • 著者名/発表者名
      Miyawaki S, Kawai Y, Takeshita A, Komatsu N, Usui N, Arai Y, Ishida F, Morii T, Kano Y, Ogura M, Doki N, Ohno R
    • 雑誌名

      Int J Heamatol 86

      ページ: 343-347

  • [雑誌論文] Phase I/II study of humanized anti-CD33 antibody conjugated with calicheamicin, gemtuzumab ozogamicin, in relapsed or refractory acute myeloid leukemia : Final results of Japanese multi-center cooperative study

    • 著者名/発表者名
      Kobayashi Y, Naito K, Takeshita A, Morishima Y, Ogura M, Besso H, Hotta T, Mitani K, Takeuchi H, Miyawaki S, Naoe T, Ohno R.
    • 雑誌名

      Int J Hematol (in press)

  • [雑誌論文] CMC544(inotuzumab ocogamicin), an ati-CD22 immuno-conjugate of calicheamicin, alters the levels of target molecules of malignant B-cells

    • 著者名/発表者名
      Takeshita A, Yamakage N, Shinjo K, Ono T, Hirano I, Nakamura S, Shigeno K, Tobita T, Maekawa M, Kiyoi H, Naoe T, Ohnishi K, Sugimoto Y, Ohno R
    • 雑誌名

      Leukemia (in press)

  • [雑誌論文] CMC-544(inotuzumab ozogamicin)shows less effect on multidrug resistant cells : analyses in cell lines and cells from patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia and lymphoma

    • 著者名/発表者名
      Takeshita A, Shinjo K, Yamakage N, Ono T, Hirano I, Matsui H, Nakamura S, Shigeno K, Tobita T, Maekawa M, Kiyoi H, Naoe T, Ohnishi K, Sugimoto Y, Ohno R
    • 雑誌名

      Br J Haematol (in press)

  • [学会発表] Cell cycle features and quantitative alteration of target molecules of malignant B cells treated with CMC544 alone or in combination with rituximab2007

    • 著者名/発表者名
      Yamakage N, Takeshita A, ShinjoK, Ono T, Hirano I, Okinaka K, Nakamura S, Shigeno K, Maekawa M, Ohnishi K, Ohno R
    • 学会等名
      Annual Meeting of American Society of Hematology, Sanfrancisco, USA
    • 発表場所
      Atranta, USA, Dec
    • 年月日
      20070000
  • [学会発表] Reduc ed effect of CMC544 on P-glycoprotein po sitive malignant B cells and its restoration by multidrug resistance modifiers2007

    • 著者名/発表者名
      Takeshita A, Shinjo K, YamakageN, O no T, Hirano I, Okinaka K, Matsui H, Nakamura S, Shigeno K, Maekawa M, Ohnishi K , Sugimoto Y , Ohno R
    • 学会等名
      Annual Meeting of American Society of Hematology, Sanfrancisco, USA
    • 発表場所
      Atranta, USA, Dec
    • 年月日
      20070000
  • [学会発表] The usefulness of the expected elevation value of serum albumin before replacement therapy

    • 著者名/発表者名
      Fujihara H, Takeshita K, Nakai S, Yamada C, Suzumura T, Uchiyama S, Takeshita A.
    • 学会等名
      Annual Meeting of AABB Montreal
    • 発表場所
      Canada
  • [学会発表] A Randomized Trial Comparing Individualized Vs. Non-Individualized Treatment for Elderly Acute Myeloid Leukemia : JALSG GML200 Study

    • 著者名/発表者名
      Wakita A, Ohtake S, Takada S, Yagasaki F, Komatsu H, Miyazaki Y, Kubo K, Kimura Y, Takeshita A, Adachi Y, Kiyoi H, Yamaguchi T, Yoshida M, Ohnishi K, Miyawaki S, Naoe T, Ueda R, Ohno R.
    • 学会等名
      Annual Meeting of American Society of Hematology
    • 発表場所
      Sanfrancisco, USA
  • [図書] Clinical Significance of P-Glycoprotein in Acute Leukemia and a Strategy to Overcome Drug Resistance

    • 著者名/発表者名
      Motoji T, Motomura S, Wang Y, Tsuji K, Takanashi M, Shiozaki H, Miyawaki S, Asou N, Takeshita A, Saburi Y, Ohno R, Mizoguchi H
    • 総ページ数
      123-151
    • 出版者
      Frontiers in Cancer Res

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公開日: 2010-06-10   更新日: 2016-04-21  

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